HPLC法測(cè)定大黃碳酸氫鈉片中的大黃素和大黃酚的含量 | HPLC法測(cè)定大黃碳酸氫鈉片中的大黃素和大黃酚的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-12-26 信息來源:admin 發(fā)布人:www.csnutilities.com 點(diǎn)擊次數(shù):2555 |
作者：曹錦紅,潘渭樵,林黎 作者單位：1.浙江省湖州市第三人民醫(yī)院 湖州 313000 2.浙江省湖州市食品藥品檢驗(yàn)所 【摘要】[目的]建立高效液相色譜法測(cè)定大黃碳酸氫鈉片中大黃素和大黃酚的含量。[方法] 采用高效液相色譜法;色譜柱為Shimpack clcODS(150×6.0mm，5.0um)，流動(dòng)相為甲醇0.1%磷酸(85∶15)，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。[結(jié)果] 此方法線性關(guān)系良好.大黃素和大黃酚的平均回收率分別為98.5%、99.3%，RSD=1.3%、0.4%(n=9)。[結(jié)論]本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可用于大黃碳酸氫鈉片的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法,大黃碳酸氫鈉片;大黃素;大黃酚 上禾生物大黃素 Abstract：[Objective] TO establish an HPLC method for the determination of emodin and chrysophanol in rhubarb sodium bicarbonate tablets.[Methods] An HPLC method was applied; Chromatographic column was Shimpack clcODS(150×6.0mm，5.0um);The mobile phase was methanol0.1% phosphoric acid (85：15);Velocity of flow was 1.0ml/min;The detaction wavelength was 254nm.[Resulet] The linearty of this method was well.Emodin and chrysophanol average recovery rates were 98.5%，99.3%;RSD=2.75%，2.83%(n=9).[Conclusion] This method is simple,accurate with strong reproducibility，and can be used for the quality control of rhubarb sodium bicarbonate tablets. Key words：HPLC; rhubarb sodium bicarbonate table; emodin; chrysophanol 大黃碳酸氫鈉片是復(fù)方制劑，主要成份是由大黃、碳酸氫鈉、薄荷油等組成，是助消化藥及抗酸藥類非處方藥藥品，主要用于食欲不振、胃酸過多[1]。大黃碳酸氫鈉片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品及制劑第一冊(cè)中[1]，并沒有對(duì)大黃進(jìn)行含量測(cè)定的內(nèi)容，本文采用高效液相色譜法對(duì)其大黃素與大黃酚的含量進(jìn)行測(cè)定。 1 儀器、樣品及試藥 Agilent 1200高效液相色譜儀，Agilent Technologies 1200 DAD檢測(cè)器，Agilent chemststion工作站。大黃素對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110756200110)，大黃酚對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110796200513)，大黃碳酸氫鈉樣品(市售，上海黃海制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：070610、070912、080417);甲醇為色譜純，水為純化水。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件 色譜柱：Shimpack clcODS(150×6.0mm);流動(dòng)相：甲醇0.1%磷酸(85∶15);檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm;流速：1.0ml/min;柱溫：25℃;進(jìn)樣量：10μl。 2.2 溶液的制備 取大黃素和大黃酚對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含大黃素113.0μg和大黃酚121.7μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。另取大黃碳酸氫鈉片樣品適量，研細(xì)，取約1片的量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10ml，超聲處理2分鐘，再加三氯甲烷10ml，加熱回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙�，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 2.3 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入色譜儀，記錄色譜圖，大黃素和大黃酚兩色譜峰分離良好，且其他各味藥材及輔料對(duì)含量測(cè)定無干擾。 2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取大黃酚(濃度為121.7μg/ml)和大黃素(濃度為113.0μg/ml)對(duì)照品溶液1ml、2ml、3ml、5ml、10ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以大黃酚峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)，濃度(x)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一大黃酚(濃度為121.7μg/ml)和大黃素(濃度為113.0μg/ml)對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果表明：大黃酚和大黃素峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.23%和0.14%表明精密度良好。 2.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取大黃碳酸氫鈉片(批號(hào)070610)按[2.1供試品溶液的制備項(xiàng)]下制備6份樣品，按照色譜條件注入高效液相色譜儀，測(cè)定大黃酚和大黃素的含量，結(jié)果見表3。結(jié)果表明：采用本方法測(cè)定大黃碳酸氫鈉片中大黃酚和大黃素的含量，結(jié)果6份樣品的峰面積積分值RSD分別為0.47%和1.32%，重現(xiàn)性良好。 2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號(hào)：070610)，按[2.1供試品溶液的制備]下制備樣品，分別在0、2、4、8、12、24小時(shí)內(nèi)測(cè)定大黃酚和大黃素的峰面積積分值。結(jié)果表明：RSD分別為0.11%和0.47%，表明大黃碳酸氫鈉片樣品在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。 2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)(070610)樣品，研細(xì)，取約0.3 g，共5份，精密稱定，分別加入含0.1217 mg/ml大黃酚0.5、1.0、1.5、2.0、3.0ml和含量0.1130mg/ml的大黃素0.2、0.5、1、1.5、2.0ml的對(duì)照品溶液，再按照“2.1”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。結(jié)果測(cè)得，大黃酚平均回收率為97.70%，RSD為0.75%(n=5);大黃素平均回收率為98.12%，RSD為0.78%(n=5)。 2.9 樣品含量測(cè)定 取批號(hào)(070610)的樣品，按照[2.1供試品溶液的制備]項(xiàng)下方法分別制得供試品溶夜和對(duì)照品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定即得。見表7。表7 樣品大黃酚、大黃素含量測(cè)定結(jié)果(略) 3 討論 3.1 本品為片劑[1]。其中大黃主要含蒽醌類成分，游離性蒽醌不易溶解于水，結(jié)合性蒽醌和蒽醌苷類溶解于水[2]。本品中的大黃的主要提取成分是結(jié)合性蒽醌和蒽醌苷[3]，故供試品溶液先采用甲醇超聲提取，溶解出蒽醌類成分，然后進(jìn)行水解和氯仿萃取，試驗(yàn)結(jié)果表明，本法提取完全，簡(jiǎn)單易行。 3.2 本實(shí)驗(yàn)還對(duì)多種流動(dòng)相條件[4]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)以甲醇-0.1%磷酸(85：15)作為流動(dòng)相，所得色譜圖中大黃素與大黃酚分離較好，柱效較高，樣品測(cè)定無干擾，是比較理想的色譜條件。 3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇，根據(jù)文獻(xiàn)記載[5]，蒽醌類成分在254nm有最大吸收，故選擇254nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。 采用HPLC法測(cè)定大黃碳酸氫鈉片中大黃素和大黃酚的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可以作為大黃碳酸氫鈉片質(zhì)量控制的方法. 【參考文獻(xiàn)】 [1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品及制劑[S].第一冊(cè).中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì)出版社，1989：8. [2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005：17. [3]匡海雪，董小萍.中藥化學(xué)[M].中國中醫(yī)藥出版社，2002,81. [4]華小東，王智華，王菊美，等.HPLC同時(shí)測(cè)定黃疸茵陳顆粒中大黃素、大黃酸、大黃酚的含量[J].中成藥，2002,24(5)：340341.
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