反相高效液相色譜法測定銀翹感冒袋泡劑中綠原酸（金銀花綠原酸）的含量 | 反相高效液相色譜法測定銀翹感冒袋泡劑中綠原酸（金銀花綠原酸）的含量 |
| 發(fā)布時間:2011-12-26 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2568 |
摘要 目的建立銀翹感冒袋泡劑中綠原酸的含量測定方法。方法 采用反相高效液相色譜法對銀翹感冒袋泡劑中綠原酸進行定量分析，色譜柱為Shimpack vpods C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相：甲醇三乙胺冰醋酸水(20∶0.3∶1∶86);檢測波長：324 nm;柱溫：30℃;流速1.0 ml.min-1;進樣量：20 μl。結果 綠原酸在0.1016～3.0480 μg范圍內(nèi)呈良好的線性(r=0.9999，n=6)，平均回收率為100.28%，RSD為1.57%(n=6)。結論 本方法準確、可靠、重現(xiàn)性好，可有效控制該制劑的質量。 【關鍵詞】 銀翹感冒袋泡劑;綠原酸;反相高效液相色譜法 金銀花綠原酸 上禾生物綠原酸 金銀花提取物綠原酸 【Abstract】 Objective To study a method to determine caffeotannic acid in Yinqiaoganmao Species by RPHPLC.Methods The caffeotannic acid in Yinqiaoganmao species was detected by RPHPLC .The column consisted of Shimpack vpods C18 column (250 mm×4.6 mm,5 μm).The mobile phase were CH3OH(C2H5)3NCH3COOHH2O(20∶0.3：1∶86),flow rate was 1.0 ml·min-1,the UV detection wavelength was 324 nm,the column temperature was 30℃.Results The caffeotannic acid was in good linearity over the range of 0.1016～3.048 μg(r=0.9999，n=6) with an average recovery of 100.28%,the RSD was 1.57%(n=6).Conclusion This method is accurate、convenient、reproducible,which can be used to control the quality of Yinqiaoganmao Species. 【Key words】yinqiaoganmao species;caffeotannic acid;RPHPLC 銀翹感冒袋泡劑是在我院臨床經(jīng)驗方的基礎上研制而成，由金銀花、薄荷、連翹等9味中藥組成，具有辛涼解表、清熱解毒之功效，主要用于治療風熱感冒、咽喉疼痛、咳嗽口干等，金銀花為方中君藥，綠原酸是其主要化學成分。為提高質量標準，達到更有效地控制該制劑內(nèi)在質量的目的，本文建立以反相高效液相色譜法測定銀翹感冒袋泡劑中綠原酸含量的方法。 材料和方法 1.儀器
島津LC20A型高效液相色譜儀(SPD20A紫外檢測器、LCSolution色譜工作站)，Mettler toledo型電子分析天平(瑞士Metter公司);CQX256型超聲波清洗機(中國北京創(chuàng)新德超聲電子研究所)。 2.試藥 綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110753200413);銀翹感冒袋泡劑(批號：090603，090610，090618，090626，090702，090712，本院自制);甲醇為色譜純;三乙胺、冰醋酸為分析純;水為純凈水。 2.方法 (1)色譜條件 色譜柱：Shimpack vpods C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相：甲醇三乙胺冰醋酸水(20∶0.3∶1∶86);檢測波長：324 nm;柱溫：30℃;流速1.0 ml.min-1;進樣量：20 μl。理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算應不低于3000。 (2)對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品適量，置25 ml量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，以配成0.508 mg·ml-1的對照品溶液，備用。 (3)供試品溶液的制備 取10小袋樣品，傾出內(nèi)容物，研細，取細粉1.00 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加50%甲醇40 ml，超聲(260 W，頻率40 kHz)處理30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。 (4)陰性對照品溶液的制備 以相同的處方比例取除金銀花外的藥材，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。 (5)線性關系考察 精密吸取對照品溶液0.25，0.50，1.50，3.00，5.00，7.50 ml，置25 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20 μl進樣，以對照品峰面積值為縱坐標(Y)，對照品的量為橫坐標(X)，進行線性回歸，得回歸方程為Y=3075.2X+32.391,r=0.9999(n=6)。結果表明綠原酸進樣量在0.1016～3.0480 μg范圍內(nèi)呈良好的線性。 (6)陰性干擾實驗 分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μl進樣測定。結果供試品溶液中在與對照品溶液相同位置上具有同一保留時間的色譜峰，而陰性對照品溶液對測定無干擾。見圖1。 (7)精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液20 μl，重復進樣6次。測得峰面積的RSD為1.02%(n=6)，表明精密度良好。 (8)穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液20 μl，分別于0，2，4，6，8，12 h 進樣，測得綠原酸的峰面積的RSD為1.05%，表明供試品溶液中綠原酸至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。 (9)重復性試驗 取同一批供試品6份，精密稱定，制備供試品溶液，進樣20 μl，測定綠原酸的含量，結果其含量的RSD為0.73%(n=6)，表明方法的重復性良好。 (10)回收率試驗 取已知含量的供試品6份，精密稱定，分別精密加入0.508 mg·ml-1的綠原酸對照品溶液2.0 ml,按供試品制備方法制備供試液，進樣，記錄色譜圖，計算回收率。結果平均回收率為100.28%，RSD為1.57%，表明回收良好。見表1。表1 綠原酸回收率試驗及結果(略) 結 果 精密稱取6個批號的樣品各適量，按供試品制備方法制備樣品溶液，在色譜條件下測定，用外標法計算綠原酸含量。結果批號為090603，090610，090618，090626，090702，090712的樣品中綠原酸含量分別為2.835，2.852，2.906，2.867，2.793，2.784 mg/袋，平均為2.840 mg/袋�；厥章试囼炂骄厥章蕿�100.28%，RSD為1.57%，表明回收良好。
討 論 1.提取方法的確定 由于綠原酸極不穩(wěn)定且極性較大，參考中國藥典[1]并結合指標成分的理化性質，我們比較了熱回流提取和超聲提取兩種方法，發(fā)現(xiàn)超聲提取較為完全且不影響指標成分的分解，利于控制該制劑的質量。 2.提取溶劑的選擇 采用甲醇、乙醇、水作為提取溶劑，通過比較單一溶劑和混合溶劑，最后選定50%甲醇溶液作為最佳提取溶劑。 3.提取時間的確定 考察了超聲提取時間的影響，結果發(fā)現(xiàn)超聲處理20、30、40 min差別不大，為了提取完全同時又節(jié)約時間，故選擇超聲提取30 min為宜。 4.檢測波長的選擇 取綠原酸對照品適量，加50%甲醇使之溶解，在200～400 nm范圍內(nèi)進行紫外掃描，結果綠原酸在324 nm波長處有最大吸收，因此選擇324 nm為檢測波長。 5.色譜系統(tǒng)的選擇 比較了甲醇三乙胺冰醋酸水(18∶0.3∶1∶85)、乙腈0.3%磷酸溶液(9∶91)[1]、乙腈0.4%磷酸溶液(10∶100)[2]三個不同組分、不同比例的流動相，最終發(fā)現(xiàn)在甲醇三乙胺冰醋酸水(20∶0.3∶1∶86)的色譜條件下，綠原酸與其他組分分離較好(分離度大于1.5，理論塔板數(shù)大于3000)，且陰性無干擾。 【參考文獻】 [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].(一部).北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：1090-1091. [2]鐘鏡金，陳豐連，王術玲，等.HPLC法測定銀翹解毒口服液中綠原酸的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2007,18(3)：228-229.
綠原酸Chlorogenic acid327-97-9 綠原酸（氯原酸,咖啡鞣酸）對照品 綠原酸98%,30%,25% 杜仲提取物Eucommia Ulmoides P.E. 熊果酸Ursolic acid 77-52-1 熊果酸對照品 熊果酸（烏索酸 烏蘇酸）98%,95%,90%,25%,10% 枇杷葉提取物Loquat Leaf P.E 金銀花提取物HoneySuchle Flowers Extract 綠原酸（氯原酸,咖啡鞣酸）Chlorogenic acid 327-97-9綠原酸98%,6%,5% 淫羊藿提取物 Epemidium Extract 淫羊藿甙、淫羊藿甙Icariin 489-32-7 淫羊藿甙60-98% 淫羊藿甙對照品 大花紫薇提取物Banaba P.E 科羅索酸corosolic acid4547-24-4 科羅索酸對照品 科羅索酸1-98% 苦杏仁提取物Bitter Apricot Seed P.E 苦杏仁苷 苦杏仁甙 Amygdalin29883-15-6 苦杏仁甙98%HPLC 大黃素（朱砂蓮甲素）Emodin 大黃提取物 大黃素5-98% 藤茶提取物Ampelopsis grossedentataP.E 二氫楊梅素（雙氫楊梅素 二氫楊梅樹皮素）Dihydromyricetin 27200-12-0 楊梅素 楊梅樹皮素Myricetin 楊梅樹皮提取物529-44-2 丹參提取物Salvia root P.E 丹參酮IIA Tanshinone ⅡA568-72- 9 98% HPLC 隱丹參酮 327-97-9;77-52-1;489-32-7;4547-24-4;29883-15-6;528-82-1;27200-12-0;529-44-2;529-44-2;528-43-8;35354-74-6 528-43-8 35354-74-6 長沙上禾生物科技有限公司 24小時客戶熱線：13875855783 網(wǎng)站：www.csnutilities.com 電話：86-0731-84213302 18975172140 MSN:jiehua0501@hotmail.com E-MAIL: jiehua0501@gmail.com staherb@staherb.com 地址：長沙麓谷高新技術開發(fā)區(qū) 上禾生物科技---專注植提，精于高純，基于您對天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
