高效液相色譜法測(cè)定排毒清脂片中大黃素和大黃酚的總量 | 高效液相色譜法測(cè)定排毒清脂片中大黃素和大黃酚的總量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-12-26 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2916 |
牟書才 安柏晶 (黑龍江仁合堂藥業(yè)有限責(zé)任公司， 黑龍江 牡丹江， 157011) 【摘要】 目的： 建立反相高效液相色譜法測(cè)定排毒清脂片中大黃酸和大黃酚總量的測(cè)定。方法： 采用回流提方法制備供試品溶液， 以 C18 柱作為色譜柱， 甲醇 -0.1%磷酸 (85:15) 為流動(dòng)相; 流速： 檢測(cè)波長： 254nm。樣品平均加樣回收率為 99.16%(n=6) ,RSD值為 1.07%,重復(fù)性試驗(yàn)RSD值大黃素為 1.99%(n=6),大黃酚為1.13% (n=6)。 結(jié)論： 方法簡(jiǎn)便， 準(zhǔn)確， 重復(fù)性好， 可作排毒清脂片的含量測(cè)定方法。 【關(guān)鍵詞】 排毒清脂片; 高效液相色譜法; 含量測(cè)定 大黃提取物大黃素 上禾生物大黃素 大黃為方中君藥， 具有較強(qiáng)的瀉下、 抗菌、 抗炎作用， 主要活性成分大黃素和大黃酚等，故測(cè)定大黃素和大黃酚的含量對(duì)控制本品質(zhì)量具有較大意義。對(duì)本品中的大黃素和大黃酚進(jìn)行了含量測(cè)定研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，在選定條件下， 分離效果良好， 方法線性、 穩(wěn)定性、 重現(xiàn)性、 回收率等方法學(xué)考察均符合定量測(cè)定的要求， 因此采用此方法， 作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)。 1 儀器、 試藥與樣品 1.1 儀器： 日本島津 LC-2010A 高效液相色譜儀、 二極管陣列檢測(cè)器。 1.2 試藥： 大黃素 (批號(hào)： 110756-200110)、 大黃酚 (批號(hào)：110796-200310) 由中國藥品生物制品檢定所提供; 甲醇 (色譜純)， 磷酸 (分析純)， 水 (純凈水)。 1.3 樣品：自制三批。(規(guī)格：本品為薄膜衣片，每片重0.37g) 2 方法與結(jié)果 2.1 樣品的制備 取重量差異項(xiàng)下的本品， 除去薄膜衣， 精密稱定， 研細(xì)， 取 0.15g， 精密稱定， 置具塞錐形瓶中， 精密加入甲醇 50ml， 稱定重量， 加熱回流 60 分鐘， 放冷， 再稱定重量， 用甲醇補(bǔ)足減失的重量， 搖勻， 濾過， 取續(xù)濾液， 即得。 2.2 陰性樣品溶液的制備 按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)處方比例同法制備不含大黃的陰性樣品溶液。 2.3 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取大黃素對(duì)照品與大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每 1ml 含大黃素4.024ug、 大黃酚7.928ug的混合溶液。 2.4 檢測(cè)波長的選擇 取上述對(duì)照溶液， 用紫外可見分光光度計(jì)在波長 190-500nm 處掃描， 結(jié)果， 大黃素在 252nm處有吸收峰， 大黃酚在 256nm 處有吸收峰， 故檢測(cè)波長為254nm。 2.5 色譜條件 色譜柱： C18 柱(島津 VP-ODS C18 150×4.6mm)， 流動(dòng)相： 甲醇 -0.1%磷酸 (85:15); 流速： 1.0ml/min，柱溫： 25℃; 檢測(cè)波長： 254nm。 2.6 線性關(guān)系考察 精密稱取大黃素對(duì)照品 10.06mg， 置100ml 量瓶中， 加甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻， 分別精密吸取 0.5ml、 1ml、 2ml、 4ml、 8ml， 分別置 50ml 量瓶中， 加甲醇稀釋至刻度， 搖勻， 即得， 分別進(jìn)樣10μl， 測(cè)定， 以峰面積積分 A 對(duì)大黃素進(jìn)樣量 C(μg)進(jìn)行回歸分析， 得回歸方程： A=3696277C-2944,r=0.9999。 表 明 大 黃 素 進(jìn) 樣 量 在0.01006～0.16096μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。精密稱取大黃酚對(duì)照品 9.91mg，置 100ml 量瓶中， 按照大黃素的方法測(cè)定， 得回歸方程： A =4867681C-5658,r=0.9999。 表明大黃酚進(jìn)樣量在0.01982～0.15856μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 2.7 精 密 度 試 驗(yàn) 分 別 取 大 黃 素 對(duì) 照 品 溶 液(4.024μg/ml)、 大黃酚對(duì)照品溶液 (7.928μg/ml)， 重復(fù)進(jìn)樣5 次， 記錄峰面積， RSD 分別為： 0.17%， 0.13%， 表明精密度較好。 2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 按供試品溶液的制備方法，對(duì)同一批樣品分別制備 6 份供試品溶液， 依法測(cè)定， 計(jì)算大黃素、 大黃酚的含量及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差， RSD分別為： 1.99%、 1.13%2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品溶液，分別在放置 0、 2、4、 6、 8h 后， 依法操作， 測(cè)定峰面積 A， RSD 分別為 0.27%、0.34%， 表明穩(wěn)定性較好。 2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已測(cè)知含量的樣品 (大黃素含量 1.431mg/g、 大黃酚含量 3.048mg/g) 0.075g， 分別精密加入 0.1006mg/ml 大黃素對(duì)照品溶液(精密稱取大黃素對(duì)照品 10.06mg，置 100ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻， 即得) 1ml、 0.1027mg/ml 大黃酚對(duì)照品溶液 (精密稱取大黃酚對(duì)照品 10.27mg， 置 100ml 量瓶中， 加甲醇溶解并定容至刻度， 搖勻， 即得) 2ml， 揮去溶劑， 按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作，依法測(cè)定， 6 次平均回收率為 101.79%， RSD 為1.46%， 表明方法回收率較好。 2.11 樣品測(cè)定 按正文含量測(cè)定方法依法測(cè)定本品， 以峰面積按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品中大黃素、 大黃酚的含量， 結(jié)果每片大黃以大黃素和大黃酚的總量平均 1.571%， RSD 為1.56%， 含量較可靠穩(wěn)定。 3 討論與小結(jié) 樣品溶液的制備比較了甲醇加熱回流法;甲醇加熱回流、 氯仿萃取法; 甲醇加熱回流提取、 酸水解、 氯仿萃取法(原劑型含測(cè)方法)。結(jié)果顯示水解與不水解測(cè)得的大黃素和大黃酚的含量差別不大，說明本品主要為游離蒽醌類成分， 故直接測(cè)定。 結(jié)果還表明用甲醇直接加熱提取即可達(dá)到較好的分離效果， 不必進(jìn)行純化處理， 考察了加熱回流時(shí)間(0.5h、 1h、 1.5h、 2h)， 結(jié)果加熱回流1h 即可提取完全。含量限度的確定 根據(jù)所測(cè)本品十批樣品， 含量最高為 1.561mg/片， 最低為 1.267mg/ 片， 排毒清脂膠囊規(guī)定每粒含大黃素、大黃酚計(jì)， 不得少于 0.8mg/ 粒。本品 1 片所含藥材量與原劑型 1 粒所含藥材量相同。故暫定本品含量限度為每片含大黃以大黃素 (C15H10O5) 和大黃酚(C15H10O4)的總量計(jì)，不得少于 0.8mg。 參考文獻(xiàn) [1] 韓剛，等. 通脈降脂膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究. 中成藥.2005， 27 (7) :778-780 [2]王英俊， 等.六味安消散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究.中國民族醫(yī)藥雜志.2005 (4)： 36-37 [3] 李武營，等. 汝安膜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究. 河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版) .2005， 24 (2)： 5-7 [4] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典 2005 年版一部.大黃項(xiàng)下P17. 高效液相色譜法測(cè)定排毒清脂片中大黃素和大黃酚的總量
綠原酸Chlorogenic acid327-97-9 綠原酸（氯原酸,咖啡鞣酸）對(duì)照品 綠原酸98%,30%,25% 杜仲提取物Eucommia Ulmoides P.E. 熊果酸Ursolic acid 77-52-1 熊果酸對(duì)照品 熊果酸（烏索酸 烏蘇酸）98%,95%,90%,25%,10% 枇杷葉提取物L(fēng)oquat Leaf P.E 金銀花提取物HoneySuchle Flowers Extract 綠原酸（氯原酸,咖啡鞣酸）Chlorogenic acid 327-97-9綠原酸98%,6%,5% 淫羊藿提取物 Epemidium Extract 淫羊藿甙、淫羊藿甙Icariin 489-32-7 淫羊藿甙60-98% 淫羊藿甙對(duì)照品 大花紫薇提取物Banaba P.E 科羅索酸corosolic acid4547-24-4 科羅索酸對(duì)照品 科羅索酸1-98% 苦杏仁提取物Bitter Apricot Seed P.E 苦杏仁苷 苦杏仁甙 Amygdalin29883-15-6 苦杏仁甙98%HPLC 大黃素（朱砂蓮甲素）Emodin 大黃提取物 大黃素5-98% 藤茶提取物Ampelopsis grossedentataP.E 二氫楊梅素（雙氫楊梅素 二氫楊梅樹皮素）Dihydromyricetin 27200-12-0 楊梅素 楊梅樹皮素Myricetin 楊梅樹皮提取物529-44-2 丹參提取物Salvia root P.E 丹參酮IIA Tanshinone ⅡA568-72- 9 98% HPLC 隱丹參酮
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