薄層掃描法測定藤茶中二氫楊梅素的含量 | 薄層掃描法測定藤茶中二氫楊梅素的含量 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 發(fā)布時(shí)間:2012-02-03 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2497 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
摘要 目的：建立藤茶質(zhì)量控制的方法。 方法：采用薄層掃描法測定藤茶中二氫楊梅素的含量。結(jié)果：藤 茶中二氫楊梅素的含量為38.17%～38.54%，回收率為98.5%，RSD為1.6%。結(jié)論：該法快速、簡單、穩(wěn)定，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。 關(guān)鍵詞：藤茶；二氫楊梅素；藤茶提取物 薄層掃描；二氫楊梅樹皮素 Determination of dihydromyricetin in ampelopsis grossedetala by TLC-sc aner He Guixia(He GX)，Zhou Tianda(Zhou TD)，Zhao Biqing(Zhao BQ) (Medicine Sub-College,Hunan College of Traditional Chinese Medi cin) ABSTRACT OBJECTIVE：To set up a method for quality control of ampelopsis grossedetala.METHOD:The content of di hydromyricetin in ampelopsis grossedetala was determinated by TLC-Scaner. RESULTS:The content of dihydromyricetin in ampelopsis grossedetala is 38.1 7%～38.54%.The mean recovery was 98.5%,and RSD was 1.6%.CONCLU SION:The method was rapid,simple,and stable.The result is reliable. KEY WORDS ampelopsis grossedetala,dihydromyricetin,TLC-scaner,cone nt determination 藤茶，又名甜茶藤Ampelopsis grossedetala系葡萄科 蛇葡萄屬植物顯齒蛇葡萄的嫩莖葉，湖南江華縣瑤族山鄉(xiāng)百姓采集莖葉，經(jīng)揉制、干燥，用 于防治感冒、中暑、腸胃不適等，相傳已有數(shù)百年應(yīng)用歷史�！吨胁菟巺R編》及《廣西藥用 植物名錄》記載，該藥性味甘淡，功效清熱解毒，主治黃膽型肝炎，感冒風(fēng)熱，咽喉腫痛 ［1,2］。該藥材制成的袋泡劑在臨床上用于高血壓及冠心病輔助治療已取得明顯效果 �；瘜W(xué)成分研究表明：藤茶中含有二氫楊梅素、楊梅素、福建茶素、β-谷甾醇、揮發(fā)油等 多種化學(xué)成分［3～5］,但有關(guān)其含量測定方法還未見報(bào)道。本文采用薄層掃描法測 定藤茶中二氫楊梅素的含量，報(bào)告如下。 1 儀器與材料 CS-930型薄層掃描儀(日本島津),UV- 365型紫外分析儀。硅膠G(青島海洋化工廠)，二氫楊梅素對照品(本院周天達(dá)教授提供，經(jīng) 光譜鑒定)，藤茶干燥嫩莖葉(湖南江華縣林科所，并由本院周天達(dá)教授鑒定)，所用試劑均 為分析純。 2 實(shí)驗(yàn)樣品的制備 2.1 供試品溶液 精密稱取藤茶干燥嫩莖葉粉末(過20目篩)5g,置索氏提取器中，用石油醚適量加熱回流2h,脫 脂后的藥材加甲醇適量加熱回流提取4h,提取液濃縮并定容至50ml,精密吸取此溶液1ml,用甲 醇稀釋定容至10ml作為供試品溶液。 2.2 對照品溶液 精密稱取二氫 楊梅素對照品10.0mg,加甲醇溶解并定容至10.0ml,制成1.0mg/ml的溶液作為對照品 溶液。 3 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果 3.1 薄層層析 用定量 毛細(xì)管吸取供試品溶液1μl,對照品溶液2μl,分別點(diǎn)樣于硅膠G-CMC-Na薄層板(105℃ 活化0.5h)上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)為展開劑，展開，展距15cm,用3% FeCl 3乙醇溶液噴霧，顯色后，覆蓋相同大小的玻璃板，四周用透明膠紙密封。二氫楊梅素斑 點(diǎn)呈紫色。薄層層析結(jié)果及掃描色譜圖見圖1，光譜掃描吸收圖見圖2。 3.2 掃描條件 對樣品色譜及對照品色譜中二氫楊梅素分別進(jìn)行光譜掃 描，結(jié)果樣品斑點(diǎn)與對照品斑點(diǎn)光譜完全一致，且二氫楊梅素在440nm處有最大吸收，故選 λS=440nm,λR=650nm。反射法鋸齒掃描，狹縫1.2mm×0.4mm,SX=3,靈敏度中，背景校正。 1-藤茶；2-二氫楊梅素
1-藤茶；2-二氫楊梅素；3-空白溶液 3.3 線性關(guān)系 準(zhǔn)確吸取對照品溶液2,4,6,8和10μl,分別點(diǎn)樣 于同一硅膠G薄層板上，依法展開，顯色，覆蓋玻璃板后掃描測定各斑點(diǎn)的面積積分值。以 對照品點(diǎn)樣量(μg數(shù))為橫坐標(biāo)，斑點(diǎn)面積積分值為縱坐標(biāo)作圖。結(jié)果表明二氫楊梅素在2.0 ～10.0μg之間具有良好的線性關(guān)系，且直線不過原點(diǎn)，故采用外標(biāo)兩點(diǎn)法測定含量，回歸 方程為:Y=1338.362X+1927.623(r=0.9991)。 3.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 以二氫楊梅素對照品試驗(yàn)，在顯色后，覆蓋玻璃板， 對同一斑點(diǎn)每隔30min掃描測定面積一次，結(jié)果在3h內(nèi)面積值穩(wěn)定，二氫楊梅素RSD=2.14%。 3.4 精密度實(shí)驗(yàn) 在同一薄層板上點(diǎn)對照品溶液5 份各1μl,在5塊不同的薄板上分別點(diǎn)對照品溶液1μl,按上述條件展開、顯色、掃描，結(jié) 果表明同板精密度較好，其RSD=0.5%(n=5);異板精密度亦較好， 其RSD=1.3%(n=5)。 表1 同板精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表2 異板精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.5 樣品含量測定 用定量毛吸管準(zhǔn)確吸取供試品溶液3個(gè)1μl和對 照品溶液2μl、6μl點(diǎn)在同一塊薄層板上，按上述條件展開、顯色、掃描，測定二氫楊梅素 斑點(diǎn)面積積分值，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算二氫楊梅素含量，結(jié)果見表3。 表3 藤茶中二氫楊梅素的含量/n=3
3.6 回收率實(shí)驗(yàn) 采取加樣回收法，取已知含量的藤茶粉末，分別添加 對照品溶液,100℃烘干，按供試品溶液的制備方法操作，依法展層，掃描測定，計(jì)算回收率 ，平均值為98.8%,RSD為2.76%。結(jié)果見表4。 表4 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果/n=3
4 討 論4.1 本品含有大量色素，采用石 油醚脫脂除去雜質(zhì)，較好地解決了斑點(diǎn)重疊和拖尾現(xiàn)象。且樣品經(jīng)甲醇回流提取4h基本將成 分提凈。 4.2 精密吸取供試品溶液1μl,對照品溶液2μl,點(diǎn)于同 一薄層板上，分別以Ⅰ:甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)和Ⅱ:甲苯-乙酸乙酯-甲醇(10 ∶8∶5)為展開劑，展開，比較分離結(jié)果，以展開劑Ⅰ展層所得薄層色譜圖分離效果好，故 采用。 4.3 測定含量時(shí)所用二氫楊梅素對照品經(jīng)光譜測定為3,5,7,3′ ,4′,5′-六羥基二氫黃酮，純度為99.9%。本方法穩(wěn)定，回收率高，重現(xiàn)性好，可以作為 目前控制藤茶質(zhì)量的一種方法。測定3批樣品，二氫楊梅素在藤茶中含量為38.1%～38.8%。 4.4 藥理實(shí)驗(yàn)表明二氫楊梅素具有鈣拮抗作用［6］，而鈣拮抗 劑是用于抗心肌缺血、抗心率失常、抗高血壓的新型藥物［7］。近年研究發(fā)現(xiàn)，黃 酮類具有抗自由基作用，A環(huán)上5，7-位羥基是抗氧活性必須的結(jié)構(gòu)條件，且清除游離基活 性與B環(huán)上羥基取代數(shù)目有關(guān)，數(shù)目多活性強(qiáng)［8］，二氫楊梅素正符合5，7位有二個(gè) 羥基，而且羥基數(shù)目多的特性，故推測二氫楊梅素還有抗自由基作用。經(jīng)測定藤茶中二氫楊 梅素的含量高達(dá)約38%，因此藤茶藥材具有重要的開發(fā)利用價(jià)值。 參考文獻(xiàn) ［1］全國中草藥匯編編寫組.中草藥匯編.下冊.人民衛(wèi)生出版 社，1997∶788. ［2］廣西醫(yī)藥研究所藥用植物園. 藥用植物名錄.203. ［3］周天達(dá)，周雪仙.藤茶中雙氫黃酮醇的分離結(jié)構(gòu)鑒定及藥 理活性.中國藥學(xué)雜志，1996，31(8)∶458. ［4］何桂霞，裴剛，周天達(dá)，等.瑤族藤茶楊梅樹皮素的分離 與結(jié)構(gòu)鑒定.基層中藥雜志，1999，13(4)∶6. ［5］袁阿興，黃筱美，.顯齒蛇葡萄化學(xué)成分的研究.中國中 藥雜志，1998，23(6)∶458. ［6］周雪仙，周天達(dá).雙氫楊梅樹皮素對兔胸主動脈條平滑肌 收縮反應(yīng)的影響.現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，1997，14(2)∶8. ［7］江明性.藥理學(xué).第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1992∶1 40，159，178，187. ［8］劉詩平.槲皮素及其衍生物的生物活性研究進(jìn)展.中草藥 ，1991，(4)∶183. 長沙上禾生物科技有限公司
上禾生物 0731*84213302 聲明：上禾生物是一家專業(yè)的植物提取物生產(chǎn)企業(yè)，公司生產(chǎn)的產(chǎn)品為原料類產(chǎn)品，僅面向企業(yè)、研發(fā)機(jī)構(gòu)、出口企業(yè)銷售。以上內(nèi)容來自文獻(xiàn)，僅供研發(fā)機(jī)構(gòu)參考。
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