【關鍵詞】 杜仲；,,亞慢性毒性 杜仲提取物 杜仲葉提取物 綠原酸 杜仲綠原酸
摘要：目的研究不同劑量的杜仲提取物水溶液對小鼠亞慢性毒性作用，為臨床應用提供依據。方法給實驗小鼠灌服不同劑量的杜仲提取物水溶液。在實驗中、末期停藥后24 h，分別取血測定血液學、血液生化和主要臟器指標，并作病理切片。結果灌胃中、低劑量（2.06 g/kg，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液，能夠提高小鼠血紅蛋白含量和紅細胞數（P＜0.01），對白細胞分類計數無影響，同時能夠提高小鼠體重、總蛋白及白蛋白含量（P＜0.01），對脾臟、肝臟、心臟、肺臟、腎、性器官指數及血清酶活性無影響（P＞0.05）。結論杜仲提取物對受試動物未見有明顯毒性作用。
【關鍵詞】 杜仲；,,亞慢性毒性 杜仲提取物 杜仲葉提取物 綠原酸 杜仲綠原酸
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我國對杜仲（Eucommia ulmoides）的利用歷史悠久，近幾年我國學者在杜仲的生物學、化學成分、生理生化等方面做了許多研究，已知杜仲的化學成分主要有：（1）木脂素類；（2）環(huán)烯醚萜類；（3）酚類化合物等，唐建軍［1］、李家實等［2］認為，杜仲中有效成分對動物血壓有雙向調節(jié)功能。唐建軍等［1］報道：杜仲含有豐富的VE和 β-胡蘿卜素，有延緩衰老、增強機體免疫體力作用。為了更好地開發(fā)利用杜仲，我們探索了張家界產杜仲提取物（以下簡稱杜仲提取物）對動物亞慢性毒性作用，并為臨床應用提供一定的理論依據。
1 材料
1.1 藥品與動物杜仲提取物：主要成分：80%氯原酸（長沙上禾生物科技有限公司有售—杜仲提取物綠原酸3-98%）。昆明種小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，8周齡，購于湖南中醫(yī)學院實驗動物中心，批號：990218。
1.2 儀器ES-C300A電子天平，湘儀天平儀器廠。MD-100自動生化分析儀器儀。美國 Leyte Drive Torranle化學儀器公司生產。
2 方法與結果
2.1 小鼠最大耐受量采用最大給藥量［3］法，在預試基礎上，取小鼠100只，雌雄各半，體重（20±2）g，隨機分成5組，分次灌服不同劑量杜仲提取物水溶液0.5 ml/次，觀察7 d內動物死亡數，同時觀察動物一般狀況及活動情況。結果見表1。動物在7 d內均無異常反應，考慮到杜仲的濃度以及小鼠的灌胃容積都已達到最大，因此，杜仲提取物的小鼠灌胃最大給藥量應大于18.52 g/kg。按小鼠的平均體重為20 g，成人平均體重60 kg，成人每日用量6~9 g［4］計算，小鼠的最大耐受倍數=18.52×60/9=124（倍），故認為本藥具有較大的安全性。
2.2 杜仲提取物對小鼠的亞慢性毒性實驗［5，6］取健康小鼠80只，體重為（20±2） g，雌雄各半，分籠顆粒飼料喂養(yǎng)，將小鼠隨機分為3個劑量組6.17，2.06，0.69 g/kg和1個對照組（生理鹽水）。各組分別以0.5 ml/次容量灌胃：1次/ d，連續(xù)8周，每周停藥2 d，期間每周稱重，并根據體重調整藥量。同時觀察動物的一般體征。實驗中、末期停藥后24 h，測定血液學指標 Hb，RBC，WBC和白細胞分類計數（DC）及血液生化指標（TP，ALB，AST，ALT，BUN，ALP和GLu），兩次采血后分兩批處死動物，對（心、肝、脾、肺、腎、性腺）主要臟器計算臟器重量系數，并做病理切片檢查。
表1 小鼠灌胃給藥最大耐受量（MTD）的測定(略)
2.2.1 杜仲提取物對小鼠體重的影響結果由表2可看出，各組小鼠在第4，8周時，中、低劑量組（2.06，0.69 g/kg）與對照組差異極顯著（P＜0.01），出現明顯的增重。第8周時，高劑量組與對照組差異不顯著（P＞0.05）。
2.2.2 小鼠血液學指標的變化結果見表3。由表3可知，實驗第4，8周時，濃度為2.06，0.69 g/kg杜仲的提取物能夠顯著提高小鼠的Hb含量及RBC（P＜0.01）。在6.17 g/kg的濃度水平下，第4周杜仲提取物顯著提高小鼠的 Hb含量及RBC（P＜0.05），第8周與對照組比較無顯著差異（P＞0.05）；實驗組N，L，E，M計數與對照組比較均差異不顯著（P＞0.05）。
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2.2.3 杜仲提取物對小鼠血液生化指標的影響結果見表4。由表4可知，第4，8周，中、低劑量組TP、ALB含量均極顯著的高于對照組（P＜0.01）。TP含量高劑量組第4周高于對照組（P＜0.05），第8周則無差異顯著性（P＞0.05）；ALB含量第4周與對照組比較差異不顯著（P＞0.05）；第8周低于對照組（P＜0.05）；G的含量第4周高劑量組和第8周各組高于對照組（P＜0.05）；BUN含量高劑量組與對照組相比差異顯著（P＜0.05），中、低劑量組與對照組無顯著差異（P＞0.05）。
表2 小鼠平均體重變化(略)
每組均與對照組比較，*表示5%的顯著水平，**表示1%的極顯著水平（下同）
表3 小鼠血液學指標(略)
動物數上排為給藥后4周，下排為第8周停藥后2 d（下同）
表4 小鼠血液生化指標(略)
2.2.4 杜仲提取物對小鼠主要臟器的影響由表5可知，各實驗組臟器指數與對照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。
表5 小鼠主要器官指數(略)
2.2.5 杜仲提取物對小鼠病理組織形態(tài)學的觀察實驗中、末期分別對小鼠進行剖檢，觀察各組織器官未見明顯的眼觀病理變化，對各組臟器進行鏡檢，均未見有意義的病理組織學改變。
3 討論
通過MTD實驗觀察，小鼠精神狀態(tài)良好，無死亡發(fā)生，給藥后的第8天處死動物，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等均無異常發(fā)生，說明小鼠對杜仲提取物MTD應大于18.52 g/kg，相當于體重為60 kg的成人用量（6~9 g）的124倍。根椐有關資料［7］，中藥的安全性以小鼠能耐受人用量的100倍以上為安全，故認為本品具有很大的安全性。對小鼠體重檢測表明：中、低劑量（2.06，0.69 g/kg）的杜仲提取物水溶液能極顯著提高小鼠的體重（P＜0.01），高濃度的杜仲提取物長時間飼喂小鼠無增重作用。王介慶等［8］用杜仲活性成分提取液對肉雞增重實驗中也有增重，本研究結果證實了這一點。血液學指標檢測表明：中、低劑量杜仲提取物水溶液能極顯著提高小鼠的 Hb含量和RBC（P＜0.01）。高劑量（6.17 g/kg）的杜仲提取物水溶液在第4周時顯著提高小鼠的紅細胞數、血紅蛋白含量（P＜0.05），第8周時則無此作用。杜仲提取物對小鼠WBC及WBC的分類計數無明顯影響。血液生化檢測結果表明：中、低劑量杜仲提取物水溶液能極顯著提高TP，ALB的含量，對血清酶AST，ALT的活性無明顯影響，這說明機體的新陳代謝加強，對養(yǎng)分的利用率升高，從而促進了小鼠的生長。高劑量杜仲提取物水溶液在第4周時能提高TP，ALB含量，第8周時則無此作用，但卻提高了AST，ALT的活性，結合有關資料［9］，推測高劑量的杜仲提取物有可能影響了肝臟的功能，從而使機體的養(yǎng)分利用降低。BUN的含量在杜仲提取物濃度為2.06，0.69 g/kg時無顯著性差異，在高劑量作用下，明顯升高，推測高劑量時有可能使腎機能受到影響。實驗期對ALP及GLu的含量無明顯影響，說明6.17 g/kg劑量以下的杜仲提取物對ALP及GLu無影響。臟器指數檢測結果表明：本品對脾臟、肺臟、心臟、腎臟、性器官指數無明顯影響，說明杜仲提取物在6.17 g/kg劑量水平以下，不損害以上臟器。以上實驗結果可知，杜仲提取物對受試動物無明顯毒性作用。
參考文獻：
�。�1］ 唐建軍，張祿源，何鳴筱，等.杜仲的研究與應用進展［J］.植物學通報，1998，（15）6：47.
［2］ 李家實，閻玉凝.杜仲皮與杜仲葉化學成分初步研究［J］.中藥通報，1986，11（8）：41.
�。�3］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南（藥學、藥理學、毒性學分冊）［M］.1994：205.
［4］ 國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2000：131.
�。�5］ 陳 奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：113.
［6］ 張 銑，劉毓谷.毒理學［M］.北京：北京醫(yī)科大學，中國協和醫(yī)科大學聯合出版社，1997：230.
�。�7］ 秦伯益.新藥評價概論，第2版［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：154.
�。�8］ 王介慶，王洪斌，朱鑒生.杜仲活性成分提取液在家禽生產中的應用［J］.中國家禽，1999，21（6）：29.
［9］ www.csnutilities.com 長沙上禾生物
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