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【關(guān)鍵詞】 菊花高效液相色譜；,,綠原酸 長沙上禾生物
摘要：目的對菊花中綠原酸含量的測定方法進(jìn)行改進(jìn)。方法采用高效液相色譜（HPLC）法測定綠原酸含量。結(jié)果菊花中綠原酸的含量按《中國藥典》2005年版Ⅰ部方法實驗，樣品提取方法復(fù)雜，含量有損失，誤差較大。結(jié)論 將含量測定方法改進(jìn)后，具有樣品溶液提取方法簡便、含量準(zhǔn)確可靠、分離效果好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，為標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供可行的依據(jù)。
關(guān)鍵詞：菊花； 高效液相色譜； 綠原酸 長沙上禾生物
菊花為菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序。藥材按產(chǎn)地和加工方法不同，分為“亳菊”“滁菊”“貢菊”“杭菊”。本文分別對亳菊和杭菊進(jìn)行了含量分析，改進(jìn)后的方法（第2法）具有樣品溶液提取方法簡便、含量準(zhǔn)確可靠等優(yōu)特點。
1 器材
氯仿、磷酸均為分析純；甲醇、乙腈均為色譜純；Agilent 1100 HPLC化學(xué)工作站；Mettler AE240電子天平；樣品由湖北省宜昌市眾生醫(yī)藥公司和湖北省紅安縣中醫(yī)醫(yī)院提供，經(jīng)宜昌市藥品檢驗所鑒定為“杭菊”，湖北某企業(yè)提供的菊花經(jīng)鑒定為“亳菊”；綠原酸對照品（由中檢所提供，供含量測定用，批號為110753200212）。綠原酸3-98%（上禾生物現(xiàn)貨供應(yīng)）
2 方法與結(jié)果
2.1 第1法按《中國藥典》2005年版Ⅰ部方法實驗。
2.1.1 色譜分析條件色譜柱為Nucleosil C18(10 μm,4.6 mm×250 mm)；柱溫25℃；流動相：0.1 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液［取磷酸二氫鈉（NaH2PO4・2H2O）15.6 g，加水至1 000 ml，制成0.1 mol/L的溶液，加入磷酸適量，使pH值為2.7］甲醇（70∶30）；檢測波長328 nm；進(jìn)樣量20 μl；流速1.0 ml/min；AUFS=0.12s。
2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。
2.1.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末（過1號篩）約1 g［同時另取樣品粉末測定水分（附錄Ⅸ H第1法）］，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流2 h，冷卻，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，蒸干，殘渣加氯仿5 ml，浸漬3 min，棄去氯仿液，殘渣揮去氯仿，加水適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得（應(yīng)于當(dāng)日測定）。
2.2 第2法（改進(jìn)后的方法）
2.2.1 色譜分析條件 流動相：乙腈0.4%磷酸溶液（12∶88），其余同第1法。
2.2.2 對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。
2.2.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末約0.5 g［同時另取樣品粉末測定水分（附錄Ⅸ H第1法）］，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置25 ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。
2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性實驗
2.3.1 第1法按《中國藥典》2005年版Ⅰ部方法實驗。理論板數(shù)：本文依法對樣品和對照品進(jìn)行了處理，并按上述條件進(jìn)行色譜測定，其理論板數(shù)為 4 495，符合《中國藥典》規(guī)定。重復(fù)性實驗：取新配制的綠原酸對照品溶液，進(jìn)樣5次，所得峰面積積分值為 5 753，5 748，5 747，5 750，5 747，RSD= 0.04% (n=5)。2.3.2 第2法（改進(jìn)后的方法）理論板數(shù)：本文依法對樣品和對照品進(jìn)行了處理，并按上述條件進(jìn)行色譜測定，其理論板數(shù)為 5 241，符合藥典規(guī)定。重復(fù)性實驗：取新配制的綠原酸對照品溶液，進(jìn)樣5次，所得峰面積積分值為5 908，5 891，5 893，5 889，5 885，RSD=0.15%(n=5)。
2.4 樣品測定結(jié)果
2.4.1 第1法將樣品依法處理。結(jié)果見表1。
表1 3批菊花樣品的測定結(jié)果(略)
2.4.2 第2法（改進(jìn)后的方法）將樣品依法處理。結(jié)果見表2。
表2 3批菊花樣品的測定結(jié)果(略)
2.5 回收率實驗(第2法) 精密稱取眾生藥業(yè)提供的菊花樣品約0.5 g，定量加入適量的綠原酸對照品，下同供試品項下操作，在上述色譜條件下測定，測得平均回收率為99.9%。結(jié)果見表3。
表3 綠原酸回收率實驗結(jié)果(略)
3 討論
3.1 菊花按《中國藥典》的方法測定綠原酸的含量，樣品溶液的提取比較復(fù)雜，含量損失大，特別是從蒸發(fā)皿中用水洗滌定容至5 ml量瓶中，誤差大， 測出的含量要比實際的含量低。
3.2 菊花按《中國藥典》的方法測定綠原酸的含量，其色譜條件不是很理想，流動相的比例要改為80∶20，效果會更好，特別對質(zhì)量很差的菊花更要注意。本實驗的樣品由于湖北某企業(yè)貯存時間太長，嚴(yán)重褪色，含量很低。若不改動流動相的比例，則色譜圖的分離效果很差。
3.3 改進(jìn)后的方法中樣品溶液的制備方法簡便、損失量少、使得測定的結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，測出的含量要比第1法高，為標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供可行的依據(jù)。
參考文獻(xiàn)：［1］ www.csnutilities.com 長沙上禾生物 | 
改進(jìn)菊花中綠原酸含量的測定方法 NEWS
