大黃素對大鼠急性胰腺炎的治療作用 | 大黃素對大鼠急性胰腺炎的治療作用 |
| 發(fā)布時間:2012-08-03 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):3334 |
大黃素對大鼠急性胰腺炎的治療作用 【摘要】 目的 探討大黃素誘導(dǎo)細胞凋亡對大鼠急性胰腺炎（ａｃｕｔｅｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ，ＡＰ）的治療作用。 方法�。矗抵唬樱拇笫蠓譃閷φ战M、胰腺炎組、治療組，每組１５只。觀察胰腺組織內(nèi)腺泡細胞凋亡指數(shù)、ＮＦκＢｍＲＮＡ、ＢａｘｍＲＮＡ、外周血中中性粒細胞（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ，ＰＭＮ）凋亡指數(shù)及天冬氨酸特 異性半胱氨酸蛋白酶（ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８）的變化情況。結(jié)果 與胰腺炎組比較，治療組腺泡細胞和ＰＭＮ 凋亡指數(shù)及胰腺組織內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ、ＢａｘｍＲＮＡ、ＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３與ｃａｓｐａｓｅ８表達均明顯增加（Ｆ＝８５３．１９９， ３２７．１２６，１４３．５８６，４８．８５７，２３１．７５０，９６．５５２，Ｐ＜０．０５）。治療組中，胰腺組織病理學(xué)評分與胰腺腺泡細胞 凋亡指數(shù)、ＰＭＮ凋亡指數(shù)均呈負相關(guān)（ｒ＝－０．９６，－０．９４，Ｐ＜０．０５）；胰腺腺泡細胞凋亡指數(shù)與胰腺組織 內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ、ＢａｘｍＲＮＡ表達呈正相關(guān)（ｒ＝０．７３，０．７６，Ｐ ＜０．０５）；胰腺組織內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ與 ＢａｘｍＲＮＡ表達呈正相關(guān)（ｒ＝０．９４，Ｐ＜０．０５）；ＰＭＮ凋亡指數(shù)與ＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８表達均呈正相 關(guān)（ｒ＝０．９９，０．９９，Ｐ＜０．０５）。結(jié)論 大黃素能有效治療ＡＰ，其機制是通過Ｂａｘ途徑誘導(dǎo)胰腺腺泡細胞 凋亡，并通過ｃａｓｐａｓｅ途徑來誘導(dǎo)外周血中ＰＭＮ凋亡，從而明顯減輕ＡＰ病情程度。 【關(guān)鍵詞】 胰腺炎; 急性； 大黃素； 凋亡
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】�。希猓辏澹悖簦椋觯濉。裕铮椋睿觯澹螅簦椋纾幔簦澹簦瑁澹澹妫妫椋悖幔悖铮妫澹恚铮洌椋睿椋睿簦瑁澹簦颍澹幔簦恚澹睿簦铮妫幔悖酰簦澹穑幔睿悖颍澹幔簦椋簦椋螅椋睿颍幔簦螅停澹簦瑁铮洌蟆。疲铮颍簦玻妫椋觯澹樱� ｒａｔｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓｇｒｏｕｐａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｉｎｄｅｘｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃａｃｉｎａｒｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦκＢｍＲＮＡａｎｄＢａｘｍＲＮＡ，ｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ（ＰＭＮ），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３ａｎｄＰＭＮｃａｓｐａｓｅ８ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ�。茫铮恚穑幔颍澹洌鳎椋簦瑁簦瑁澹穑幔睿悖颍澹幔簦椋簦椋螅纾颍铮酰�，ｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｉｎｄｅｘｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃａｃｉｎａｒｃｅｌｌｓａｎｄＰＭＮ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮＦκＢｍＲＮＡ，ＢａｘｍＲＮＡ，ＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３ａｎｄＰＭＮｃａｓｐａｓｅ８ｉｎｐａｎｃｒｅａｓｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ（Ｆ＝８５３．１９９，３２７．１２６，１４３．５８６，４８．８５７，２３１．７５０，９６．５５２， Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｓｃｏｒｅｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓｗａｓｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｉｎｄｅｘｏｆｔｈｅｐａｎｃｒｅａｔｉｃａｃｉｎａｒｃｅｌｌｓａｎｄＰＭＮ（ｒ＝－０．９６，－０．９４，Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｉｎｄｅｘｏｆｔｈｅｐａｎｃｒｅａｔｉｃａｃｉｎａｒ ｃｅｌｌｓｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦκＢｍＲＮＡ，ＢａｘｍＲＮＡｉｎｐａｎｃｒｅａｓｔｉｓｓｕｅ（ｒ＝０．７３，０．７６， Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＦκＢｍＲＮＡｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈａｔｏｆＢａｘｍＲＮＡ（ｒ＝０．９４，Ｐ＜０．０５）． ＴｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｉｎｄｅｘｏｆＰＭＮｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３ａｎｄＰＭＮｃａｓｐａｓｅ８ （ｒ＝０．９９，０．９９，Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ�。牛恚铮洌椋睿幔欤欤澹觯椋幔簦澹螅幔悖酰簦澹穑幔睿悖颍澹幔簦椋簦椋螅觯椋幔颍澹纾酰欤幔簦椋睿纾簦瑁澹幔穑铮穑簦铮螅椋螅铮妫穑幔睿悖颍澹幔簦椋悖幔悖椋睿幔颍悖澹欤欤螅簦瑁颍铮酰纾瑁拢幔穑幔簦瑁鳎幔幔睿洌颍澹纾酰欤幔簦椋睿纾簦瑁澹校停危幔穑铮穑簦铮螅椋螅簦瑁颍铮酰纾瑁悖幔螅穑幔螅澹穑幔簦瑁鳎幔� 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】�。校幔睿悖颍澹幔簦椋簦椋�，ａｃｕｔｅ；�。牛恚铮洌椋�； Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 急性胰腺炎（ａｃｕｔｅｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ，ＡＰ）是臨床上常 見的急腹癥之一，常伴全身炎癥反應(yīng)綜合征或ＭＯＤＳ［１］。中藥大黃對ＡＰ的治療效果已經(jīng)得到普遍認可，但作用機制尚不清楚［２－３］。本研究旨在以凋亡信號傳導(dǎo)的原理來初步探討大黃素治療大鼠ＡＰ可能的分子生物學(xué)機制。 １ 材料與方法 １．１ 動物分組和模型制備 ４５只ＳＤ大鼠購自南通大學(xué)實驗動物中心，雌雄不限，體質(zhì)量２５０～３００ｇ。實驗前１２ｈ禁食不禁水。分為３組，每組１５只。對照組：剖腹探查；胰腺炎組：３％戊巴比妥腹腔注射麻醉，逆向穿刺胰膽管緩慢注射３．５％�；悄懰徕c，建立大鼠ＡＰ模型。治療組：建立大鼠ＡＰ模型，開腹后經(jīng)小腸穿刺給予大黃素２．５μｇ／ｇ（南京建成生物研究所）。建立模型后對照組大鼠無死亡，胰腺炎組死亡４只，治療組死亡２只。各組存活大鼠中選�。保爸蛔鳛檠芯繉ο蟆� １．２ 檢測方法 建立模型后１２ｈ開腹，腹主動脈采全血５ｍｌ，離心后待測，同時無菌條件下取胰腺組織。碘淀粉比色法測定血清淀粉酶；ＥＬＩＳＡ法測定血清ＴＮＦα；ＴＵＮＥＬ法檢測腺泡細胞凋亡情況。凋亡指數(shù)：選擇４個高倍鏡視野，每個視野中計算２５０個腺泡凋亡細胞數(shù)；組織病理學(xué)評分標準按改良Ｓｃｈｍｉｄｔ法［４］進行；ＲＴＰＣＲ法檢測胰腺組織內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ、Ｂａｘ ｍＲＮＡ的表達；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測外周血中中性粒細胞（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ，ＰＭＮ）ｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８的表達；流式細胞儀分析腺泡細胞凋亡情況：ＡｎｎｅｘｉｎＶ陽性為凋亡細胞，ＰＩ陽性為壞死細胞，ＡｎｎｅｘｉｎＶ和ＰＩ雙陽性為凋亡晚期或壞死細胞。 １．３ 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用Ｓｔａｔａ７．０統(tǒng)計軟件進行分析。數(shù)據(jù)用珋ｘ±ｓ表示，數(shù)據(jù)間比較采用方差分析，兩兩比較采用ＳＮＫｑ檢驗，兩者間相關(guān)關(guān)系采用直線相關(guān)分析。Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 ２ 結(jié)果 ２．１ 各組大鼠血清淀粉酶和ＴＮＦα及組織病理學(xué) 評分情況 胰腺炎組和治療組血清淀粉酶、ＴＮＦα表達較對照組明顯升高，但治療組各項指標均較胰腺炎組低（表１，圖１）。 ２．２ 各組大鼠腺泡細胞及外周血中ＰＭＮ凋亡情況 治療組腺泡細胞和外周血中ＰＭＮ凋亡指數(shù)均較胰腺炎組明顯升高（表２，圖２）。 ２．３ 各組大鼠胰腺組織內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ和Ｂａｘ ｍＲＮＡ以及外周血中ＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３和ｃａｓｐａｓｅ８的表達情況 治療組胰腺組織內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ、ＢａｘｍＲＮＡ及外周血中ＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８的表達均較胰腺炎組明顯升高（表３）。 ２．４ 治療組大鼠各檢測指標間的相關(guān)分析 胰腺組織病理學(xué)評分與腺泡細胞凋亡指數(shù)、外周血中ＰＭＮ凋亡指數(shù)均呈負相關(guān)（ｒ＝－０．９６，－０．９４，Ｐ＜０．０５）；腺泡細胞凋亡指數(shù)與胰腺組織內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ、ＢａｘｍＲＮＡ表達呈正相關(guān)（ｒ＝０．７３，０．７６，Ｐ ＜０．０５）；胰腺組織內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ與ＢａｘｍＲＮＡ表達呈正相關(guān)（ｒ＝０．９４，Ｐ＜０．０５）；外周血中ＰＭＮ凋亡指數(shù)與ＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８表達均呈正相關(guān)（ｒ＝０．９９，０．９９，Ｐ＜０．０５）。
３ 討論 ３．１ 大黃素對ＡＰ的治療作用 本研究結(jié)果顯示：與胰腺炎組比較，治療組腺泡細胞凋亡明顯增多，其腺泡細胞凋亡指數(shù)與組織病理學(xué)評分呈負相關(guān)。同時我們還發(fā)現(xiàn)，治療組可誘導(dǎo)外周血中ＰＭＮ凋亡，且ＰＭＮ凋亡指數(shù)亦與組織病理學(xué)評分呈負相關(guān)。因此，我們認為ＡＰ病程中可能同時存在腺泡細胞凋亡和外周血中ＰＭＮ凋亡兩種狀況，設(shè)法誘導(dǎo)細胞凋亡對治療ＡＰ具有重要價值。
３．２ 大黃素誘導(dǎo)細胞凋亡治療ＡＰ的可能機制 大黃素誘導(dǎo)凋亡機制主要通過非受體途徑，即Ｂａｘ和ｃａｓｐａｓｅ８等分支途徑實現(xiàn)［５］。然而，大黃素誘導(dǎo)凋亡的一些中間環(huán)節(jié)仍未完全明了。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，胰腺組織內(nèi)ＢａｘｍＲＮＡ表達與其腺泡細胞凋亡指數(shù)呈正相關(guān)，提示Ｂａｘ途徑在大黃素治療ＡＰ中發(fā)揮重要作用。治療組大鼠胰腺組織內(nèi)ＮＦκＢｍＲＮＡ的表達較胰腺炎組顯著升高，且與ＢａｘｍＲＮＡ表達呈正相關(guān)，提示ＮＦκＢ也參與了大黃素誘導(dǎo)腺泡細胞凋亡。由此，我們推測大黃素治療ＡＰ時，促進了腺泡細胞內(nèi)ＮＦκＢ的產(chǎn)生和活化。而作為重要的基因調(diào)控因子，ＮＦκＢ在Ｂａｘ等基因的啟動子上有結(jié)合位點并調(diào)控其表達，隨著ＮＦκＢ基因表達活性增強，Ｂａｘ基因表達活性亦增強。促凋亡基因Ｂａｘ表達上調(diào)，必然使腺泡細胞凋亡增加，減輕胰腺炎病情。因此，大黃素誘導(dǎo)腺泡細胞凋亡機制的Ｂａｘ途徑中，ＮＦκＢ可能就是大黃素－Ｂａｘ中間環(huán)節(jié)的待確定因素。 既往研究發(fā)現(xiàn)，ＰＭＮ凋亡主要由ｃａｓｐａｓｅ介導(dǎo)。本研究發(fā)現(xiàn)治療組大鼠外周血中ＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８表達較胰腺炎組明顯升高，且治療組大鼠外周血中ＰＭＮｃａｓｐａｓｅ３、ｃａｓｐａｓｅ８表達與ＰＭＮ凋亡指數(shù)呈正相關(guān)。這提示在ＡＰ病程中，大黃素可誘導(dǎo)外周血中ＰＭＮ的凋亡，其誘導(dǎo)凋亡機制可能與ｃａｓｐａｓｅ分支途徑關(guān)系密切。 綜上所述，我們認為大黃素對ＡＰ的治療作用是多層面的，除了通過誘導(dǎo)胰腺腺泡細胞凋亡減輕胰腺局部病理損傷外，還可能通過誘導(dǎo)外周血中ＰＭＮ凋亡發(fā)揮治療ＡＰ的作用。 參考文獻 ［１］ 周新澤，郝磊，毛勤生．從全身炎癥反應(yīng)綜合征角度評判急性 胰腺炎預(yù)后及其臨床價值．中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，２００７，１７（４）： ４５４－４５７． ［２］ 周黎明，萬莉紅，李貴星，等．大黃素對大鼠急性壞死型胰腺炎 的干預(yù)作用．中藥藥理與臨床，２００６，２２（２）：１５－１６． ［３］ 李敬東，李波，劉續(xù)寶，等．重癥急性胰腺炎的中西醫(yī)結(jié)合治 療．消化外科，２００３，２（５）：３５０－３５３． ［４］ ＳｃｈｍｉｄｔＪ，ＬｅｗａｎｄｒｏｗｓｉＫ，ＷａｒｓｈａｗＡＬ，ｅｔａｌ．Ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃａｎｄｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙｏｆａｎｅｗｍｏｄｅｌｏｆａｃｕｔｅｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ ｉｎｔｈｅｒａｔ．ＩｎｔＪＰａｎｃｒｅａｔｏｌ，１９９２，１２（１）：４１－５１． ［５］�。蹋澹澹龋冢牛妫妫澹悖簦螅幔睿洌恚澹悖瑁幔睿椋螅恚铮妫澹恚铮洌椋睿铮睿悖澹欤欤椋睿瑁酰恚幔睿欤酰睿� ｓｑａｍｏｕｓｃｅｌｌ．ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００１，１３４（１）：１１－２０．
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