牛黃解毒片中黃芩苷和大黃素的含量測(cè)定 | 牛黃解毒片中黃芩苷和大黃素的含量測(cè)定 |
| 發(fā)布時(shí)間:2012-09-27 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2675 |
牛黃解毒片中黃芩苷和大黃素的含量測(cè)定 摘要: 目的 研究測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷和大黃素的含量。方法 采用高效液相色譜法 色譜柱: SB -C18柱( 41 6mm @ 150mm, 5Lm) ; 流動(dòng)相: 甲醇-01 2%磷酸; 檢測(cè)波長 280nm; 柱溫: 25 e ; 流速: 11 0mL#min- 1; 結(jié)果 黃芩苷在 51952 ~ 14818Lg#mL - 1 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好( r =019994) , 平均回收率 971 5%, RSD 為 11 93%; 大黃素在 61 048~ 1511 2Lg#mL- 1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好( r= 01 9970) , 平均回收率 961 6%, RSD 為1172%。結(jié)論 該方法靈敏度高, 重現(xiàn)性好, 可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。 關(guān)鍵詞: HPLC; 大黃素; 黃芩苷; 牛黃解毒片 牛黃解毒片,是清熱解毒中成藥的代表。由牛黃、雄黃、石膏、 大黃、 黃芩、 桔梗、 冰片和甘草組成,有清熱解毒的作用,用于火熱內(nèi)盛、 咽喉和牙齦腫痛、 口舌生瘡等癥112。生產(chǎn)廠家較多,用藥量較大。制劑中黃芩苷122和大黃素為其主要有效成分。因此為全面了解牛黃解毒片的質(zhì)量, 對(duì)牛黃解毒片中有效成分黃芩苷和大黃素的含量進(jìn)行了測(cè)定。 1 儀器、 藥品與試劑 111 儀器 電子天平, 恒溫水浴鍋, 抽濾器, Agilent 1100 高效液相色譜儀, DAD 檢測(cè)器。 112 藥品與試劑 牛黃解毒片 ( 批號(hào) 8121775、 8121776、8121777) ,標(biāo)準(zhǔn)品: 黃芩苷( 中國藥品生物制品檢定所 批號(hào)110715 - 200212) , 大黃素( 中國藥品生物 制品檢定所 批號(hào)110756 - 200110) 。甲醇( HPLC) , 水為超純水, 化學(xué)試劑均為分析純。 2 黃芩苷與大黃素的含量測(cè)定 211 色譜條件與系統(tǒng)適用性研究 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑, 甲醇 -012% 磷酸溶液為流動(dòng)相, 梯度洗脫程序( 見表 1) , 檢測(cè)波長 280nm,流速 1 10mL#min- 1。 212 溶液的配制 21211 對(duì)照品溶液的配制:分別精密稱取黃芩苷與大黃素對(duì)照品適量, 加甲醇制成每毫升含黃芩苷 0 1 1488mg, 大黃素011512mg 的混合貯備液。 表 1 洗脫程序 時(shí)間( min) 流速( mL#min- 1) 甲醇( %) 01 2%磷酸( %) 21212 供試品溶液的配制:取本品 10 片, 除去包衣,精密稱定,研細(xì),精密稱取 1 1 0g, 加乙醇 30mL, 稱定重量, 水浴回流1h,放冷,補(bǔ)足損失, 濾過, 取續(xù)濾液 25 1 00mL, 置燒瓶中, 水浴蒸干, 加 30%乙醇 -鹽酸( 10B1) 30mL, 水浴回流 1h, 氯仿振搖提取 3 次, 每次 10mL, 蒸干, 殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ萦?0mL 容量瓶中, 即得。 圖1 HPLC 色譜圖 A: 對(duì)照品色譜圖 B: 樣品色譜圖 ( 1: 黃芩苷; 2: 大黃素) 213 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品貯備液0 1 20m1100mL、 2 1 00mL、 3 100mL、4100、 5 1 00mL, 置 5mL 容量瓶中,甲醇定容到刻度。按色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積( A) 為縱坐標(biāo), 濃度(Lg#mL- 1) 為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 黃芩苷回歸方程 y= 141978x- 331234, R= 0 1 9994, 結(jié)果表明黃芩苷在51952~ 14818Lg#mL- 1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。大黃素回歸方程 y = 191571x - 42 1 427, r = 0 1 9970。結(jié)果表明大黃素在61048~ 15112Lg#mL- 1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 214 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液在上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定 5 次, 黃芩苷的 RSD 為 0 1 95%,大黃素的 RSD 為 1148%,表明儀器精密度良好。 215 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液,在上述色譜條件下,分別于 1、 2、 3、 4、 5h考察供試品溶液的穩(wěn)定性, 連續(xù)測(cè)定 5 次, 結(jié)果黃芩苷的RSD 為 2102%, 大黃素的 RSD 為1103%, 表明樣品在 5h 內(nèi)穩(wěn)定。 216 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品,按供試品制備方法進(jìn)行處理, 按色譜條件進(jìn)行測(cè)定,黃芩苷平均含量為 0 1 8644mg#g- 1,RSD 為 1 1 54%, 大黃素平均含量為 1 1 0665mg# g- 1, RSD 為115%。 217 加樣回收率測(cè)定 精密稱取已知含量的牛黃解毒片樣品015g, 精密加入對(duì)照品貯備液 5mL, 按供試品制備方法制備測(cè)定, 黃芩苷平均回收率 9715%, RSD 為 1193%, 大黃素平均回收率 96 1 6%, RSD 為 1 1 72%。 218 樣品測(cè)定 按供試品制備方法, 按色譜條件進(jìn)樣,分別精密吸取對(duì)照品三依中文溶液與供試品溶液各 5ul, 注入液相色譜儀,色譜圖( 見圖 1) ,測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷含量為 0 1 8652mg#g- 1、 大黃素的含量為 110749mg#g- 1。 3 討論 311 2010版藥典中只對(duì)其有效成分黃芩苷做了規(guī)定,而另一有效成分大黃素則未有規(guī)定122,本文同時(shí)測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷和大黃素的含量,具有操作簡(jiǎn)單, 穩(wěn)定,精密度高, 重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn), 可以作為該制劑的質(zhì)量控制方法。 312 本試驗(yàn)最終確定了以甲醇 - 0 1 2% 磷酸梯度洗脫系統(tǒng), 樣品中的黃芩苷和大黃素能得到良好的分離, 使本來需要多次的分析方法一次完成; 通過參考文獻(xiàn)對(duì)比提取方法13~ 52,最終確定醇回流提取 1h 后酸化提取, 再用氯仿萃取的方法, 得到的樣品含量較高。 參考文獻(xiàn) 112李靜瑜1HPLC 法測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷的含量1J21 中國藥師, 2001, 4( 5) : 356 -3571 122中華人民共和國藥典委員會(huì)1 中國藥典, 2010, Ñ 部1S21 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 5661 132張科偉, 李偉, 蔡皓, 等1HPLC 雙波長法測(cè)定一清膠囊中黃芩苷、大黃素的含量1J2 1 中成藥, 2005, 27( 6) : 653 - 6551 142吳麗群1HPLC 法測(cè)定牛黃解毒片中黃芩苷的含量1J21 |
