TLC檢測(cè)（薄層色譜法） Thin-Layer Chromatography--上禾生物
薄層色譜法(TLC 上禾生物)，系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后，根據(jù)比移值(Rf)與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖的比移值(Rf)作對(duì)比，用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，也用于跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。
薄層色譜，或稱薄層層析(thin-layer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù)。這是一種快速分離諸如脂肪酸、類固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)的特別有效的層析方法，從50年代發(fā)展起來至今，仍被廣泛采用。
基本原理上禾生物
薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對(duì)同一吸附劑吸附能力不同，使在移動(dòng)相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達(dá)到各成分的互相分離的目的。
薄層層析可根據(jù)作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。
吸附是表面的一個(gè)重要性質(zhì)。任何兩個(gè)相都可以形成表面，吸附就是其中一個(gè)相的物質(zhì)或溶解于其中的溶質(zhì)在此表面上的密集現(xiàn)象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發(fā)生吸附現(xiàn)象。
物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留，這是因?yàn)楣腆w表面的分子(離子或原子)和固體內(nèi)部分子所受的吸引力不相等。在固體內(nèi)部，分子之間相互作用的力是對(duì)稱的，其力場(chǎng)互相抵消。而處于固體表面的分子所受的力是不對(duì)稱的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質(zhì)分子在運(yùn)動(dòng)中遇到固體表面時(shí)受到這種剩余力的影響，就會(huì)被吸引而停留下來。吸附過程是可逆的，被吸附物在一定條件下可以解吸出來。在單位時(shí)間內(nèi)被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時(shí)間內(nèi)離開此表面的分子之間可以建立動(dòng)態(tài)平衡，稱為吸附平衡。吸附層析過程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸附與解吸的動(dòng)態(tài)平衡過程。
例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力與分配系數(shù)的不同，使混合物得以分離。當(dāng)溶劑沿著吸附劑移動(dòng)時(shí)，帶著樣品中的各組分一起移動(dòng)，同時(shí)發(fā)生連續(xù)吸附與解吸作用以及反復(fù)分配作用。由于各組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對(duì)它們的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點(diǎn)。如作為標(biāo)準(zhǔn)的化合物在層析薄板上一起展開，則可以根據(jù)這些已知化合物的Rf值(后面介紹Rf值)對(duì)各斑點(diǎn)的組分進(jìn)行鑒定，同時(shí)也可以進(jìn)一步采用某些方法加以定量。
薄層層析中展開劑的選擇 上禾生物
主要根據(jù)極性的不同來選擇流動(dòng)相展開劑。各種展開劑按其極性不同排序?yàn)?
烷烴<烯烴<醚類<硝基化合物<二甲胺<酯類<酮類<醛類<硫醇<胺類<酰胺<醇類<酚類<羧酸
遷移值
薄層層析硅膠Rf=溶質(zhì)移動(dòng)的距離/溶液移動(dòng)的距離。表示物質(zhì)移動(dòng)的相對(duì)距離。
各種物質(zhì)的Rf 隨要分離化合物的結(jié)構(gòu)，濾紙或薄層板的種類、溶劑、溫度等不同而不同，但在條件固定的情況下，Rf對(duì)每一種化合物來說是一個(gè)特定數(shù)值。
儀器與材料
⑴載板變色硅膠
用以涂布薄層用的載板有玻璃板、鋁箔及塑料板，對(duì)薄層板的要求是:需要有一定的機(jī)械強(qiáng)度及化學(xué)惰性，且厚度均勻、表面平整，因此玻璃板是最常用的。載板可以有不同規(guī)格，但最大不得超過20×20，玻璃板在使用前必須洗凈、干燥備用。玻板除另有規(guī)定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。
⑵固定相(吸附劑)或載體
薄層層析硅膠薄層層析硅膠最常用的有硅膠G、硅膠GF〈[254]〉、硅膠H、硅膠HF〈[254]〉，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F〈[254]〉等。其顆粒大小，一般要求直徑為10~40μm。
薄層涂布，一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用10~15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時(shí))，混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5~0.7%)適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。上禾生物
⑶ 涂布器薄層層析硅膠
應(yīng)能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。
⑷ 點(diǎn)樣器
定性:內(nèi)徑為0.5mm管口平整的普通毛細(xì)管。
定量:微量注射劑。
點(diǎn)樣直徑不超過5mm，點(diǎn)樣距離一般為1~1.5cm即可。
⑸ 展開室
應(yīng)使用適合載板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴(yán)密的蓋子，除另有規(guī)定外，底部應(yīng)平整光滑，應(yīng)便于觀察。上禾生物
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