杜仲提取物對(duì)雌二醇致腎陽(yáng)虛小鼠的影響 | 杜仲提取物對(duì)雌二醇致腎陽(yáng)虛小鼠的影響 |
| 發(fā)布時(shí)間:2013-05-17 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):1923 |
摘要】 目的：觀察杜仲提取物對(duì)雌二醇致腎陽(yáng)虛小鼠的影響。認(rèn)識(shí)杜仲“甘，溫，入肝、腎經(jīng)”藥性的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵。方法：采用腹腔注射苯甲酸雌二醇造成小鼠腎陽(yáng)虛模型。ICR雄性小鼠72只，隨機(jī)分為對(duì)照組，模型組，桂附地黃丸組，杜仲水提取物組、正丁醇提取物組、乙酸乙酯提取物組，共6組，每組12只。對(duì)小鼠體征、肛溫、抓力、游泳時(shí)間、自主活動(dòng)、血清肌酐（Cr）及尿素（UR）、血液學(xué)指標(biāo)、睪丸和精囊腺指數(shù)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：杜仲水提取物能提高腎陽(yáng)虛小鼠肛溫、游泳時(shí)間、自主活動(dòng)、睪丸和精囊腺指數(shù)、Hb、WBC、LY、MO、PLT，降低UR；正丁醇提取物能提高小鼠抓力、游泳時(shí)間、自主活動(dòng)次數(shù)、睪丸和精囊腺指數(shù)、RBC、Hb、WBC、LY、MO、PLT，降低UR；乙酸乙酯提取物能提高小鼠肛溫、抓力、精囊腺指數(shù)、Hb、PLT，降低Cr、UR。結(jié)論：杜仲的藥理作用可作為改善腎陽(yáng)虛證之腰膝酸軟、性欲減退、畏寒肢冷、精神萎靡、陽(yáng)虛水泛，以及腎精虧虛、肝氣虛弱所致血液虧虛的基礎(chǔ)；并作為其“甘，溫，入肝、腎經(jīng)藥”藥性現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵的組成部分。杜仲水提取物和正丁醇提取物的作用較為接近且較強(qiáng)。 【關(guān)鍵詞】 小 鼠 腎陽(yáng)虛 杜 仲 提取物 性 味 歸 經(jīng) 上禾生物 Effects of Cortex Eucommiae Extracts on Estradiolinducecd Kidneyyang Deficiency Mice FAN Jing, et al. Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou (310053), China Abstract Objective:To observe the effects of extracts from Cortex Eucommiae on estradiolinduced kidneyyang deficiency in mice and to understand the modern scientific connotation of the properties theories about sweetflavor, warmnature, meridian tropism in liver and kidney. Methods:Kidneyyang deficiency mice model was established with intraperitoneal injection of estradiol benzoate. A total of 72 healthy adult male ICR mice were randomly divided into 6 groups: control group, model group, positive control group (Guifudihuang), and 3 groups of Cortex Eucommiae (water extract, nbutanol extract, and acetoacetate extract), 12 mice in each group. The effects were observed by measuring physical sign, rectal temperature, grip strength, swimming time, locomotor activity, serum creatinine and urea levels, haematological indexed, testis index and seminal vesicle index. Results:The water extract markedly improved the rectal temperature, swimming time, locomotor activity, testis index, seminal vesicle index, Hb, WBC, LY, MO and PLT, and decreased urea. The nbutanol extract had the similar effects as the water one did except for increasing RBC instead of the rectal temperature. The acetoacetate extract dramatically improved the rectal temperature, grip strength, seminal vesicle index, Hb and PLT, and decreased urea and creatinine. Conclusion:These effects of Cortex Eucommiae could be as the basic of improving the symptoms of kidneyyang deficiency such as soreness of the waist and knees, hyposexuality, intolerance of cold and cold limbs, feeling listless and inert, edema, and blood deficiency that is induced by kidneyessence and liverqi deficiency, and also could be an important part of the modern scientific connotation of the properties theories about sweetflavor, warmnature, meridian tropism in liver and kidney. The effects of the water and nbutanol extracts were similar to each other and both stronger compared to the acetoacetate one. Key words mice Cortex Eucommiae kidneyyang deficiency extract property and flavor meridian tropism 中國(guó)《藥典》2005年版記載，杜仲味甘，性溫，歸肝、腎經(jīng)，功能補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎，用于腎虛腰痛、筋骨無(wú)力、胎動(dòng)不安等�！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》謂杜仲“主腰脊痛，補(bǔ)中益精氣，堅(jiān)筋骨，強(qiáng)志……久服輕身不老”。杜仲可用于治療各種腎陽(yáng)不足所致之證。為探討其性、味、歸經(jīng)的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，開(kāi)展如下研究。 1 實(shí)驗(yàn)材料 1.1 藥 物 鹽杜仲，批號(hào)080110，購(gòu)自浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片廠，經(jīng)鑒定為杜仲科植物杜仲Eucommiaulmoides Oliv.樹(shù)皮的炮制品。藥材先制成水提取物；再取藥材用10倍體積95%乙醇提取2次，分別制成乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物。水、正丁醇、乙酸乙酯提取物分別加吐溫80稀釋至0.125g生藥/mL。 1.2 試 劑 肌酐、尿素試劑盒（Cr、UR，上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司，批號(hào)P071254、P080431）。血液分析試劑（美國(guó)A Drew Scientific Group Co.，批號(hào)5018）。苯甲酸雌二醇（上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)070902）。桂附地黃丸（蘭州太寶制藥有限公司批號(hào)，80080542）。 1.3 動(dòng) 物 ICR小鼠，雄性，體重18～22g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK（浙）20030001。 1.4 儀 器 HEMAVET950動(dòng)物血液分析儀（美國(guó)A Drew Scientific Group Co.）；XZ4型5光道小鼠自發(fā)活動(dòng)自動(dòng)記錄儀、YSL13A大小鼠抓力測(cè)定儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備供應(yīng)維修站）；威圖SELECTRAE全自動(dòng)生化儀（荷蘭威圖公司）；DTITB電子體溫計(jì)（上海華辰醫(yī)用儀表有限公司）；LP123電子天平（江蘇省常熟市衡器廠）。 2 實(shí)驗(yàn)方法 2.1 造模與給藥 健康ICR雄性小鼠72只，隨機(jī)分為對(duì)照組，模型組，桂附地黃丸組，杜仲水提取物組、正丁醇提取物組、乙酸乙酯提取物組，共6組，每組12只。除對(duì)照組外，其余5組按0.1mL/10g體重腹腔注射0.4mg/mL的苯甲酸雌二醇大豆油稀釋液，1天1次，連續(xù)15天，造成腎陽(yáng)虛模型[1]。杜仲提取物各組給予相應(yīng)的0.125g生藥/mL提取物，桂附組給予0.15g生藥/mL桂附地黃丸混懸液，對(duì)照組和模型組給予0.4%吐溫80，0.1mL/10g灌胃給藥，1天1次，連續(xù)15天。 2.2 指標(biāo)檢測(cè) 觀察小鼠一般體征。于給藥前3天和給藥第12天測(cè)量肛溫。給藥前3天和給藥第13天測(cè)定游泳時(shí)間，超過(guò)1小時(shí)的以1小時(shí)計(jì)。給藥前2天和給藥第14天測(cè)定抓力，每只小鼠連續(xù)測(cè)定2次，取平均值。給藥前1天和給藥第15～16天，記錄10min小鼠自主活動(dòng)次數(shù)。末次給藥后，摘眼球取血，一份不加抗凝劑，取血清，依說(shuō)明書(shū)測(cè)定血清Cr、UR；另一份加枸櫞酸鈉抗凝，取血后4小時(shí)內(nèi)測(cè)血液學(xué)指標(biāo)：紅細(xì)胞數(shù)量（RBC）、血紅蛋白濃度（Hb）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板數(shù)量（PLT）、白細(xì)胞數(shù)量（WBC）、嗜中性粒細(xì)胞數(shù)量（NE）、淋巴細(xì)胞數(shù)量（LY）、單核細(xì)胞數(shù)量（MO）、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量（EO）、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量（BA）。處死小鼠，摘取睪丸、精囊腺，計(jì)算指數(shù)（%）=臟器重量/體重×100%。 2.3 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)以（±s）表示，組間比較采用ttest檢驗(yàn)。 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.1 對(duì)一般體征的影響 對(duì)照組小鼠皮毛干爽光滑，精神狀態(tài)良好，喜動(dòng)而不喜臥。模型組小鼠皮毛汗?jié)褙Q立，精神萎靡，弓背萎縮，喜擠臥而不喜動(dòng)。杜仲提取物各組在實(shí)驗(yàn)前期（給藥第1～7天）也出現(xiàn)與模型組小鼠相同體征，但在實(shí)驗(yàn)后期（給藥第8～15天）逐漸恢復(fù)正常。 3.2 對(duì)肛溫的影響 給藥前各組間肛溫?zé)o明顯差異。與對(duì)照組比較，給藥第12天，模型組肛溫明顯降低（P<0.01），說(shuō)明體溫下降造模成功；與模型組比較，杜仲水提取物組和乙酸乙酯提取物組肛溫明顯升高（P<0.05），正丁醇提取物對(duì)肛溫有升高趨勢(shì)。結(jié)果說(shuō)明杜仲具有升高腎陽(yáng)虛小鼠肛溫的作用，見(jiàn)表1。表1 各組小鼠肛溫比較與對(duì)照組比較， 3.3 對(duì)游泳時(shí)間的影響 給藥前各組間游泳時(shí)間無(wú)明顯差異。與對(duì)照組比較，給藥第13天，模型組游泳時(shí)間顯著減少（P<0.01），說(shuō)明腰膝酸軟造模成功；與模型組比較，桂附地黃丸組、杜仲水提取物組和正丁醇提取物組游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)（P<0.05）。結(jié)果說(shuō)明杜仲可能有改善腰膝酸軟的作用，見(jiàn)表2。 3.4 對(duì)抓力的影響 給藥前各組間抓力無(wú)明顯差異。與對(duì)照組比較，給藥第14天，模型組小鼠抓力顯著減弱（P<0.01），說(shuō)明腰膝酸軟造模成功；與模型組比較，桂附地黃丸組、杜仲正丁醇提取物組和乙酸乙酯提取物組小鼠抓力明顯增強(qiáng)（P<0.01～0.05）。結(jié)果說(shuō)明杜仲可能具有改善腰膝酸軟的作用，見(jiàn)表3。表2 各組小鼠游泳時(shí)間比較（±s） 3.5 對(duì)自主活動(dòng)的影響 給藥前各組間自主活動(dòng)無(wú)明顯差異。與對(duì)照組比較，給藥第15～16天，模型組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯減少（P<0.01），說(shuō)明精神萎靡造模成功；與模型組比較，桂附地黃丸組、杜仲水提取物組和正丁醇提取物組自主活動(dòng)次數(shù)顯著增多（P<0.01）。結(jié)果說(shuō)明杜仲可能有改善腎陽(yáng)虛小鼠精神萎靡的作用，見(jiàn)表4。 3.6 對(duì)Cr、UR水平的影響 ①與對(duì)照組比較，模型組Cr有升高趨勢(shì)；與模型組比較，杜仲乙酸乙酯提取物組Cr明顯降低（P<0.05），水提取物組和正丁醇提取物組Cr有降低趨勢(shì)。②與對(duì)照組比較，模型組UR顯著升高（P<0.01）；與模型組比較， 桂附地黃丸組、杜仲水提取物組、正丁醇提取物組和乙酸乙酯提取物組UR明顯降低（P<0.01）。結(jié)果顯示杜仲具有改善腎陽(yáng)虛小鼠腎功能的作用，見(jiàn)表5。表4 各組小鼠自主活動(dòng)比較表5 各組小鼠Cr、UR水平比較 3.7 對(duì)血液學(xué)指標(biāo)的影響 ①與模型組比較，杜仲正丁醇提取物明顯升高RBC（P<0.01），水提取物、正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物顯著升高Hb（P<0.01～0.05）。②與模型組比較，杜仲水提取物和正丁醇提取物明顯升高WBC、LY、MO （P均<0.05）。③與模型組比較，桂附地黃丸組、杜仲三個(gè)提取物都顯著升高PLT（P<0.01～0.05）。結(jié)果表明杜仲各提取物能不同程度影響腎陽(yáng)虛小鼠血液學(xué)指標(biāo)，見(jiàn)表6～8。表6 各組小鼠紅細(xì)胞參數(shù)比較表7 各組小鼠白細(xì)胞參數(shù)比較表8 各組小鼠血小板數(shù)比較 3.8 對(duì)睪丸、精囊腺指數(shù)的影響 結(jié)果顯示，①與對(duì)照組比較，模型組睪丸指數(shù)明顯減�。≒<0.01）；與模型組比較，杜仲水提取物組和正丁醇提取物組睪丸指數(shù)顯著升高（P<0.01～0.05），乙酸乙酯提取物組有改善趨勢(shì)。②與對(duì)照組比較，模型組精囊腺指數(shù)明顯減小（P<0.01）；與模型組比較，桂附地黃丸組、杜仲水提取物組、正丁醇提取物組及乙酸乙酯提取物組精囊腺指數(shù)皆顯著升高（P均<0.01）。結(jié)果說(shuō)明杜仲可能有改善腎陽(yáng)虛小鼠性欲減退的作用，見(jiàn)表9。表9 各組小鼠睪丸、精囊腺指數(shù)比較 4 討 論 參考國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布《中醫(yī)臨床診療術(shù)語(yǔ)》，腎陽(yáng)虛證的主癥有腰膝酸軟，性欲減退，畏寒肢冷；次癥有精神萎靡，夜尿頻多，下肢浮腫，動(dòng)則氣促，發(fā)槁齒搖，舌淡苔白，脈沉遲，尺無(wú)力。具備以上主癥2項(xiàng)、次癥2項(xiàng)，即可診斷為腎陽(yáng)虛證。 腰膝酸軟癥狀目前尚無(wú)相應(yīng)的客觀指標(biāo)考察。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠抓力減小和游泳時(shí)間縮短反映該癥。結(jié)果杜仲正丁醇提取物能不同程度提高小鼠抓力和游泳時(shí)間，水提取物能延長(zhǎng)游泳時(shí)間，乙酸乙酯提取物能提高抓力。這些作用可能與杜仲甘溫入腎，能溫陽(yáng)、補(bǔ)肝、益腎作用有關(guān)。 目前多用交配能力、血清性激素水平、生殖器官指數(shù)等指標(biāo)考察性欲冷淡癥[3～5]。本實(shí)驗(yàn)觀察了小鼠睪丸、精囊腺指數(shù)，結(jié)果顯示，杜仲水提取物和正丁醇提取物能不同程度升高小鼠睪丸、精囊腺指數(shù)，乙酸乙酯提取物能升高小鼠精囊腺指數(shù)。這些作用可能與杜仲甘溫入腎，能溫補(bǔ)腎陽(yáng)，填精益腎作用有關(guān)。 由于暫缺可精確測(cè)量動(dòng)物四肢溫度的儀器（預(yù)試驗(yàn)采用紅外測(cè)溫儀，結(jié)果誤差大），故本實(shí)驗(yàn)觀察小鼠肛溫。實(shí)驗(yàn)結(jié)果，杜仲水提取物和乙酸乙酯提取物能不同程度提高小鼠肛溫。這可能與杜仲性溫，能溫陽(yáng)散寒作用有關(guān)。 本實(shí)驗(yàn)采用自主活動(dòng)次數(shù)來(lái)反映[6]精神萎靡癥狀。實(shí)驗(yàn)結(jié)果，杜仲水提取物和正丁醇提取物能不同程度增加小鼠自主活動(dòng)次數(shù)。這可能與杜仲性溫，能溫補(bǔ)陽(yáng)氣作用有關(guān)。 陽(yáng)虛水泛為腎陽(yáng)虛兼證之一。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠血清Cr、UR水平升高反映該證[7]。結(jié)果顯示，杜仲三種提取物都能不同程度降低Cr、UR水平。這些作用可能與杜仲性溫，能溫陽(yáng)行氣利水有關(guān)。 腎精虧虛致化血無(wú)力，肝氣虛弱致肝不藏血，從而導(dǎo)致血液虧虛。本實(shí)驗(yàn)采用血液學(xué)指標(biāo)變化反映該證。結(jié)果顯示，杜仲三種提取物均能升高Hb、PLT，杜仲水提取物和正丁醇提取物能不同程度升高WBC、LY、MO，正丁醇提取物還能升高RBC。這些作用可能與杜仲甘溫入肝腎，能補(bǔ)腎填精，溫陽(yáng)益氣作用有關(guān)。 比較杜仲水提取物、正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物作用發(fā)現(xiàn)，杜仲水提取物和正丁醇提取物的作用接近且較強(qiáng)，為甘，溫，歸肝、腎經(jīng)共同藥效物質(zhì)群提供了啟示，有待進(jìn)一步分析性、味、歸經(jīng)等藥性與藥效及化學(xué)物的關(guān)系。 【參考文獻(xiàn)】 8：www.csnutilities.com www.staherb.cn |
