| 抗感顆粒由金銀花、赤芍等藥材經(jīng)適當加工制成。金銀 花為君藥，現(xiàn)行《中國藥典》(2005版)抗感顆粒標準收載中 僅有金銀花的主要藥用成分綠原酸的鑒別方法．尚未收載其 含量測定方法，不利于該制劑的質量控制。對抗感顆粒中綠 原酸含量測定通過設計正交實驗的超聲提取研究未見報 道『l-4]。本研究通過正交實驗對抗感顆粒中綠原酸的超聲提取 條件進行優(yōu)化，建立高效液相色譜法準確、快速測定抗感顆 粒中綠原酸含量的方法，為抗感顆粒質量控制的完善提供可 靠依據(jù)。
1實驗材料
1．1儀器與試劑
Agilent 1200型HPLC儀，四元梯度泵，柱溫箱，VWD可 變波長檢測器(Agilent Technologies)；7725i手動進樣器配2O l定量杯；Human PowerIII超純水機；KQ118型超聲波清 洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；AD一2Z Autobalanee (Perkin—Klmer)
綠原酸對照品(批號110753—200413)購于中國藥品生 物制品檢定所；甲醇為HPLC級試劑：實驗用水為超純水；冰 醋酸為分析純�？垢蓄w粒(規(guī)格l0 袋，批號070310、070618、 070712)購于長春市某大藥房。
1．2色譜條件
Agilent 1200型高效液相色譜儀：Liehrospher—XDB—C18 柱(4．6mmx250mm，5 I．zm，Agilent)；柱溫2 ；檢測波長326 nm； 流動相：甲醇：2％冰醋酸水溶液(20：80)；流速1．0 mYmin。
1．3供試品制備
精密稱取本品0．25 g置于小燒杯中．用適量甲醇水溶液 溶解，定量轉移至50 ml容量瓶中，超聲，0．45 m微孔濾膜 過濾，取續(xù)濾液。
2方法與結果
2．1系統(tǒng)適用性實驗
圖1中綠原酸與距離最近組分的分離度為4．2，理論塔 板數(shù)按綠原酸計為nef=9 264．5。本試驗色譜條件下被測組 分與樣品中其他組分能很好地分離。
2．2標準曲線
配置濃度為1l0．0、55．0、22．5、11．2、5．6 I,ZgJ ml的綠原酸 對照品，并分別吸取22．5 g／ml綠原酸對照品溶液100 Ixl， 以20 l定量杯定量。按最佳色譜條件測定，記錄色譜峰面 積，標準曲線為： =54．1C一52．2(R2=9 993，n-6)，結果表明在 5．6～110．0 Ixg／ml濃度范圍內．綠原酸含量與峰面積具有良好 的線性關系。
2．3精密度實驗
取綠原酸濃度為22．5 Ixg／ml的對照品溶液．重復進樣 6次，記錄色譜峰面積，計算得RSD為2．07％ ，說明儀器具有 較好的精密度。
2．4綠原酸提取工藝優(yōu)選
2-4．1實驗因素與水平以甲醇水溶液作為溶劑。以抗感顆粒 裝量項下綠原酸提取量為考核指標，優(yōu)選提取綠原酸的工藝 條件，包括甲醇濃度、提取時間、提取溫度，采用 (341正交表 進行實驗，因素水平見表1。
2．4．2提取工藝優(yōu)選精密稱取抗感顆粒0．25 g于50 ml容 量瓶中稀釋至刻度并精確稱重。按表2中確定的條件進行超 聲，冷卻后用甲醇補足失重．HPLC測定．實驗結果見表2。
分析結果表明，影響抗感顆粒中綠原酸提取的因素為： 溫度>提取時間>溶劑濃度。綠原酸是奎寧酸和咖啡酸的酯。 對熱不穩(wěn)定[51。故最佳提取溫度為60℃。提取時間短，綠原酸 不能完全溶出；提取時間延長．在超聲波的長時間作用下可 能發(fā)生解離16]，最佳提取時間為15 min。溶劑濃度對提取率影 響不大�？垢蓄w粒中綠原酸提取的最佳條件為20％甲醇、 60℃ 、提取15 rain
2．5穩(wěn)定性實驗
精密吸取同一供試品溶液，按最佳色譜條件分別在0、 4、8、12、24 h取供試品溶液注入液相色譜儀測定。樣品溶液 的穩(wěn)定性實驗表明，室溫下8 h內測定峰面積基本一致。
2．6回收率實驗
取已知含量的供試品，分別精密加入綠原酸對照品適 量，按實驗所得最佳條件進行測定，綠原酸平均回收率為 98．9％，RSD為2．38％。
2．7專屬性實驗
按處方比例，制備不含金銀花提取物的陰性樣品，按樣 品測定方法進樣分析。采用HPLC測定綠原酸時．其他成分 對測定無干擾。
2．8樣品含量測定
取三種不同批號的樣品按最佳實驗條件超聲提取、測 定。實驗結果如表3，表明此方法能夠快速、準確、穩(wěn)定地反 映抗感顆粒中綠原酸的真實含量。
3討論
通過采用正交實驗設計對抗感顆粒中綠原酸的超聲提 取進行考察，建立了超聲提�。甊P—HPLC測定抗感顆粒中綠原酸含量的方法。本研究是對《中國藥典》(2005年版)的有 益補充，為進一步完善抗感顆粒的質量控制標準提供了準 確、簡便、可行的測定方法。
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