胡椒堿的檢測(cè)方法 | 胡椒堿的檢測(cè)方法 |
| 發(fā)布時(shí)間:2013-07-23 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2198 |
早期測(cè)定胡椒堿的方法主要是凱氏定氮法、稱重法、甲醛釋放法等，但由于其操作繁瑣 測(cè)定的胡椒堿不準(zhǔn)確。因此主要介紹近幾年應(yīng)用廣，方法可靠的胡椒堿測(cè)定方法。目前檢測(cè)胡椒堿，最常用的方法是高效液相色譜法(HPLC)，薄層色譜法 毛細(xì)管電泳法，紫外分光光度法，極譜法等。 1 薄層色譜法 薄層色譜是近幾年發(fā)展的一種微量，快速分離和定性的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。屬于固-液吸附色譜。薄層色譜具有樣品用量少、有機(jī)溶劑消耗少、檢測(cè)迅速無(wú)固定相污染等優(yōu)勢(shì)。 胡椒堿的薄層色譜定量法，在GF254 硅膠板上，用甲苯：乙酸乙酯：乙醚(6：3 ；1)的二元展開(kāi)體系將胡椒堿有效的分離。分離后的試樣在波長(zhǎng)337 nm下掃描定量，胡椒堿的線性范圍為 15~75 ng 加標(biāo)回收率為 94.53% 表明高效薄層色譜法能夠作為檢測(cè)胡椒堿的一種簡(jiǎn)便、快速掃描和定量方法。 2 液相色譜法 液相色譜(HPLC)法是測(cè)定胡椒堿最成熟的方法之一。它以其分離度高、準(zhǔn)確、快速等優(yōu)點(diǎn)在檢測(cè)生物活性物質(zhì)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。胡椒堿在3~150 g/mL 時(shí)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) 0.999 4 胡椒堿的檢測(cè)限為 1.2 g/mL，胡椒幼果中胡椒堿的含量為 4.153 mg/g 成熟果中胡椒堿的含量為 27.2 mg/g 胡椒花不含胡椒堿。反相高效液相色譜法測(cè)定胡椒根中胡椒堿的含量，采用色譜柱為 Luna C18 柱(250 mm*4.60 mm， 5um) 流動(dòng)相為甲醇：水(77：23) 流速為 1.0 mL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)為 343 nm 柱溫為 35。C。 3 毛細(xì)管電泳法 毛細(xì)管電泳是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力、依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。它具有分離效率高、速度快、靈敏度高、所需樣品少、成本低等特點(diǎn)。 細(xì)管電泳法測(cè)定了白胡椒中胡椒堿的含量，電泳條件為石英毛細(xì)管柱(50 um *90 cm,實(shí)際長(zhǎng)度81.5 cm) 運(yùn)行，緩沖液 0.02 mol/L Na2HPO4 ，0.02 mol/L NaH2PO4 ＝95: 5(16 。C時(shí) pH ＝8.6) 分離電壓為 28kV 壓力進(jìn)樣 30 mbar *8 s ，溫度為 25。C， 檢測(cè)波長(zhǎng)為 343 nm。 4 紫外分光光度法 紫外分光光度法是利用胡椒堿結(jié)構(gòu)上的苯環(huán)以及共軛雙鍵 因而具有獨(dú)特的吸收光譜 利用胡椒堿能吸收紫外光的性質(zhì)可以對(duì)胡椒堿進(jìn)行測(cè)定。胡椒堿的乙醇溶液在紫外光譜區(qū) 342 nm處有一個(gè)最大的吸收峰 利用該峰建立了紫外分光光度計(jì)測(cè)定胡椒堿含量的方法 該法測(cè)定的胡椒堿在濃度為 0 70 g/mL 范圍內(nèi)服從比耳定律。但是其他的生物堿例如胡椒林堿 胡椒亭堿以及其他一些在此波長(zhǎng)下也有吸收值的物質(zhì)會(huì)對(duì)測(cè)定的結(jié)果造成干擾，因此紫外分光光度法測(cè)定的胡椒堿含量通常會(huì)比真實(shí)值偏高。 5 極譜法 由于胡椒堿有兩個(gè) C＝ C在酸性條件下可在滴汞電極上發(fā)生還原反應(yīng)，從而產(chǎn)生極譜峰。胡椒堿在 -1.01 V(vs.SCE)左右 pH 值為2.2 的 Britton-Robinson 緩沖溶液中產(chǎn)生靈敏的極 譜峰，建立了峰電流與胡椒堿濃度在 0.05 8 g/mL范圍內(nèi)的相關(guān)曲線 結(jié)果表明采用極譜法測(cè)定的胡椒堿簡(jiǎn)單 快速 靈敏 但由于滴汞電極中汞蒸氣有毒以及汞電極在較正電位下容易氧化等因素，使得極譜法應(yīng)用的范圍越來(lái)越小。 |
