HupA 的分離及檢測方法學(xué)研究 | HupA 的分離及檢測方法學(xué)研究 |
| 發(fā)布時(shí)間:2013-09-23 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):1888 |
Hup A 在蛇足石杉等石杉科植物中含量極低，為分離、純化得到較高產(chǎn)率的 Hup A，研究人員正努力探索、尋找理想的分離方法，并對檢測方法進(jìn)行了大量研究． 1 HupA 的提取及分離 石杉生物堿的提取可分為酸水溶液提取法和有機(jī)溶劑提取法．常見的提取方法有酒石酸浸泡、鹽酸滲漏、Soxhlet 抽提以及乙醇回流提取等。 張秀堯等用乙醇滲漏、減壓濃縮，殘留液加水，去沉淀，水液減壓濃縮，經(jīng)氧化鋁柱多次層析，TLC 制備分離，丙酮-甲醇、丙酮重結(jié)晶，得到 8 個(gè)生物堿結(jié)晶并鑒定了Serratine (Ⅰ)、Serratinine (Ⅱ)和Lycodoline(Ⅲ)3個(gè)成分的結(jié)構(gòu)．沈生榮等用酒石酸浸提、萃取、脫色和重結(jié)晶等提取分離技術(shù)從蛇足石杉中提取分離制得 HupA 單體．孫遠(yuǎn)明等分別利用甲醇 Soxhlet 抽提法、乙醇 Soxhlet 抽提法、氯仿 Soxhlet 抽提法及稀鹽酸水浸提法對比提取 HupA，發(fā)現(xiàn)氯仿 Soxhlet 抽提法 HupA 得率最高，為 0.019 6%．袁珊琴等用 2%鹽酸浸提蛇足石杉生藥粉，濾液以陽離子交換樹脂進(jìn)行初步分離，所得總生物堿用硅膠 G 柱層析低壓分離，乙醇-冰醋酸(體積比100∶ 7 )為洗脫劑，所得 5 個(gè)組成部分利用制備型薄層層析，以甲醇-石油醚、石油醚、丙酮-石油醚、無水乙醇-丙酮萃取重結(jié)晶，得到了石松生物堿的不同單體．查圣華等利用微波協(xié)助提取 HupA，發(fā)現(xiàn)微波協(xié)助提取比傳統(tǒng)提取方法時(shí)間短、操作簡便、成本低、雜質(zhì)少、回收率高，是一種較為理想的提取方法．查圣華利用超聲提取蛇足石杉中的HupA，與傳統(tǒng)回流法相比，時(shí)間由 2 h 縮短到 15 min，且回收率更高，是一種比較理想的提取方法．許慧等用檸檬酸、酒石酸、醋酸、磷酸、鹽酸 5 種酸水溶液，冷浸樣品 20 h，過濾濃縮，氨水調(diào) pH 至 9，氯仿萃取，濃縮至干，甲醇定容到至 10 mL．HPLC 分析后發(fā)現(xiàn) HupA用不同酸水溶液提取，所得回收率在同一水平，從成本核算以及實(shí)驗(yàn)的可操作性，采用鹽酸提取更為合理．許慧等用 1.0%鹽酸冷浸、滲漏、超聲、甲醇熱回流 4 種方法制備 HupA，發(fā)現(xiàn)甲醇熱回流和超聲所得 HupA 的回收率較高，但產(chǎn)品純度較低，給后續(xù)分離純化帶來困難；1.0%鹽酸水滲漏和冷浸的產(chǎn)品純度較高，滲漏的回收率高于冷浸．劉嘉森等用 95%乙醇提取出蛇足石杉全草中的生物堿，以稀氫氧化鈉溶液萃取，得到酚性生物堿經(jīng)堿性硅膠柱層析，以不同體積比的氯仿-甲醇(98∶ 2 、97∶ 3 、96∶ 4 )洗脫，各流份進(jìn)行薄層層析檢測，展開劑為氯仿-丙酮-甲醇(體積比50∶ 4 5∶ 5 )，單一成分回收，蒸干后加丙酮，重結(jié)晶，得到 HupA 單體。 HupA 提取、分離一般采用酸溶液浸提和醇溶液浸提，酸提法以鹽酸浸提為首選，有機(jī)溶劑以氯仿效果較佳．用微波協(xié)助提取、超聲提取優(yōu)于傳統(tǒng)回流提取法．研究不同溶劑浸提的方法及輔助浸提手段獲得高回收率、高純度的產(chǎn)品是 HupA 提取研究的方向． 2 HupA 的檢測方法 2.1 紫外掃描法 HupA ((5 R，9 R，11 E)-5-氨基-11-亞乙基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-亞甲環(huán)芳辛并-2(1H) 吡啶酮，分子式為 C15H18N2O，分子量為242.32．HupA 與其他生物堿有部分相同的物理性質(zhì)，可采用經(jīng)典生物堿提取方法進(jìn)行提取，但其獨(dú)特的空間環(huán)和酰氨基使它具有與一般生物堿不同的特點(diǎn)，用一般的生物堿染色方法不能使其染色，但可以用酸性乙醇-FeCl3染色，使其呈黃綠色，并可利用該性質(zhì)進(jìn)行紫外掃描測定其含量． 由于 HupA 具有鄰位雙取代的 a-吡啶酮環(huán)和孤立雙鍵，紫外吸收光譜圖的最大吸收峰分別位于204、231、311 nm 左右，考慮到溶劑的紫外吸收截止波長，204 nm 作為檢測波長不合適，在 23l nm近紫外區(qū)干擾較多，一般選擇 311 nm 左右為紫外分析時(shí) HupA 的檢測波長。 2.2 高效液相色譜法 高效液相色譜法(HPLC)是目前檢測 HupA 靈敏度很高的一種方法。HPLC 法檢測 HupA 的色譜條件分離柱一般選用 C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相以甲醇、乙腈為有機(jī)相，磷酸二氫鈉溶液(磷酸二氫鉀溶液)、醋酸銨溶液為水相等按不同比例配比，檢測波長選用 310 nm左右，可得到良好的分析結(jié)果． |
