苦杏仁苷(苦杏仁苷)的提取與純化方法 | 苦杏仁苷(苦杏仁苷)的提取與純化方法 |
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苦杏仁苷的提取與純化方法 苦杏仁苷的提取方法 1.1水提法 苦杏仁苷屬于水溶性芳香族氰苷，李強(qiáng)和陳錦屏(2006a)研究水提取杏仁中苦杏仁昔時(shí)，影響提取效果的主次順序?yàn)樘崛r(shí)間>料液比>浸泡時(shí)間。最佳提取參數(shù)為：提取時(shí)間20min，料液比1:10，浸泡時(shí)間30min，提取2次。并測(cè)得新疆小白杏杏仁中苦杏仁苷含量為3.084%。用水作萃取劑，雖然能溶解苦杏仁苷，但同時(shí)也溶解樣品中的部分蛋白質(zhì)、糖類(lèi)等有機(jī)成分，不利于分離純化。 1.2有機(jī)溶劑提取法 目前報(bào)道的主要有機(jī)溶劑有乙醇和甲醇，但因?yàn)榧状加幸欢ǖ亩拘�，通常用�?lái)測(cè)定，苦杏仁苷的提取多用乙醇溶液。用乙醇溶液作提取劑可減少蛋白質(zhì)等雜質(zhì)的溶出，有利于測(cè)定和純化。魏金停和葉舟(2007b)對(duì)枇杷核苦杏仁苷乙醇提取工藝進(jìn)行了研究，得出最佳提取工藝參數(shù)為：水浴溫度90°C、乙醇濃度60%、液固比6:1、回流3次，每次Ih。崔國(guó)庭和田呈瑞(2005a)研究了以苦杏仁為原料，乙醇為提取劑，獲得了苦杏仁苷的乙醇提取條件，即用60%乙醇在80°C條件下提取3次，每次45min。 1.3超聲波輔助提取法 超聲波萃取(UltrasoundExtraction，UE),亦稱(chēng)為超聲波輔助萃取、超聲波提取，是利用超聲波福射壓強(qiáng)產(chǎn)生的強(qiáng)烈空化效應(yīng)、擾動(dòng)效應(yīng)、高加速度、擊碎和攪拌作用等多級(jí)效應(yīng)，增大物質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標(biāo)成分進(jìn)入溶劑，促進(jìn)提取的進(jìn)行(劉偉等，2007;陳正和劉常坤，2004)。吳迪(2006b)研杏仁中苦杏仁苷的超聲波提取工藝最佳條件為：提取溫度80°C，超聲波功率90W,提取液料比18:1，提取時(shí)間30min，苦杏仁苷的提取率達(dá)到83.07%。李強(qiáng)(2006b)研究杏仁中苦杏仁苷最佳提取工藝為：乙醇濃度60%,超聲波功率250W，提取液料比8:1，提取時(shí)間15min。 1.4超臨界萃取法 超臨界流體(Supercritical Fluid，簡(jiǎn)寫(xiě)為SCF)，是超過(guò)臨界溫度(Tc)和臨界壓力(Pc)的非凝縮性的高密度流體。超臨界流體沒(méi)有明顯的氣液分界面，既不是氣體，也不是液體，是一種氣液不分的狀態(tài)，性質(zhì)介于氣體和液體之間，具有優(yōu)異的溶劑性質(zhì)，粘度低，密度大，有較好的流動(dòng)、傳質(zhì)、傳熱和溶解性能。流體處于超臨界狀態(tài)時(shí)，其密度接近于液體密度，并且隨流體壓力和溫度的改變發(fā)生十分明顯的變化，而溶質(zhì)在超臨界流體中的溶解度隨超臨界流體密度的增大而增大。超臨界流體萃取正是利用這種性質(zhì)，在較高壓力下，將溶質(zhì)溶解于流體中，然后降低流體溶液的壓力或升高流體溶液的溫度，使溶解于超臨界流體中的溶質(zhì)因其密度下降溶解度降低而析出，從而實(shí)現(xiàn)特定溶質(zhì)的萃取。超臨界流體萃取法有效地克服了傳統(tǒng)分離方法的不足，他利用在臨界溫度以上的高壓氣體作為溶劑，分離、萃取、精制有機(jī)成分(王欣和李元瑞，2000)。Kawahito等(2008)研究利用超臨界提取枇杷核中苦杏仁苷的條件為：溫度80°C，壓力20MPa, 二氧化碳流速為3mL/min,提取時(shí)間180min，得到枇杷核中苦杏仁苷的含量為 16.38mg/go 2苦杏仁苷純化方法 2.1柱層析法 柱層析法是一種使不同分子相互分離的過(guò)程，當(dāng)一混合樣物被導(dǎo)入一固定相中后，流動(dòng)相通過(guò)時(shí)，由于樣品各組分與固定相和流動(dòng)相相互作用的大小不同，使各組分通過(guò)固定相支持的速率不同而得分離。柱層析按分離原理大體上可以分為：吸附層析、分配層析、離子交換層析、凝膠層析等(劉培楠，1957;斯特蘭，1959)。在苦杏仁昔的分離純化中，吸附層析應(yīng)用較廣，常用的吸附劑有桂膠、大孔樹(shù)脂、聚醜胺等。樹(shù)脂吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附質(zhì))之間的范德華引力，通過(guò)它巨大的比表面進(jìn)行物理吸附而工作，使有機(jī)化合物根據(jù)有吸附力及其分子量大小可以經(jīng)一定溶劑洗脫分開(kāi)而達(dá)到分離、純化、濃縮等不同目的(蔡寅等，2006;吳華等，2008)。影響吸附在樹(shù)脂上的枇杷核苦杏仁苷的洗脫率的因素主要有洗脫液性質(zhì)、洗脫液流速、洗脫液體積等。由于枇杷核苦杏仁苦在乙醇溶液中有一定的溶解度，一般可采用一定濃度的乙醇溶液作為洗脫溶劑。崔國(guó)庭(2005b)用LSA-30大孔樹(shù)脂純化苦杏仁苷，純度為80%。采用大孔樹(shù)脂純化苦杏仁苷，該方法操作簡(jiǎn)單、純化效果好。李強(qiáng)(2006b)用聚酷胺柱層析純化苦杏仁苷收率為90.67%，苦杏仁苦含量為87.30%。 2.2乙醇結(jié)晶法 晶體的形成與分子的性質(zhì)、溫度、溶劑以及雜質(zhì)的的類(lèi)型等因素相關(guān)，其中溶劑的選擇和結(jié)晶溫度的控制是調(diào)控結(jié)晶過(guò)程最主要的手段(Pigman和Horton，1970)。溫度慢慢降低，則有可能析出晶形較大、純度較高的晶體�？嘈尤受赵诶湟掖贾腥芙舛缺容^小，在熱乙醇中溶解度比較大，在乙醇中的溶解度隨溫度變化明顯，可以利用此特性來(lái)純化苦杏仁苷。利用苦杏仁苷不溶于乙醚，而油脂和部分雜質(zhì)溶于乙醚，在乙醇中添加適量的乙醚可起到純化作用。李強(qiáng)(2006b)將苦杏仁苦粗品(含量為20.86%)溶于15倍的95%的乙醇，常溫下結(jié)晶24h，同時(shí)添加5%的乙醚作為純化劑，得苦杏仁苷的含量為75.19%。車(chē)?guó)P斌(1997)研究以野生扁桃為原料制取苦杏仁苷，純化時(shí)乙醇添加量以16倍為好，同時(shí)加入5%的乙醚，室溫下結(jié)晶2411，純化效果最好，純度可達(dá)80%左右。 2.3低速逆流色譜分離法 低速逆流色譜(Slow Rotary Counter-current Chromatography, SRCCC )技術(shù)是一種新型的液-液分配技術(shù)，它不用任何固體載體或支撐體。從90年代幵始，逆流色譜技術(shù)就被應(yīng)用于植物化學(xué)成分的分離制備與研究幵發(fā)(戴德舜等，2001;張?zhí)煊樱?991)。目前使用較為廣泛的是高速逆流色譜技術(shù)即IV型逆流色譜儀，此項(xiàng)技術(shù)已被應(yīng)用于生化、生物工程、醫(yī)藥、天然產(chǎn)物化學(xué)、有機(jī)合成、環(huán)境分析、食品、地質(zhì)、材料等領(lǐng)域(袁黎明等，1998)。低速逆流色譜(SRCCC)的模型即V型逆流色譜儀最早是Ito(1988)提出來(lái)的，與高速逆流色譜技術(shù)相比，在工作原理上有所不同。高速逆流色譜儀在工作過(guò)程中分離柱不但繞儀器中心軸線(xiàn)公轉(zhuǎn)，而且柱支持體本身繞自身軸線(xiàn)旋轉(zhuǎn)；而低速逆流色譜儀器只繞儀器中心軸線(xiàn)公轉(zhuǎn)(Ito和Bowman，1978； Du等，2000)。由于低速逆流色譜具有較低的轉(zhuǎn)速(0?200rpm)，因此機(jī)器在運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程中更加穩(wěn)定，更有利于放大，實(shí)現(xiàn)更大規(guī)模的制備分離。董莉莉和杜琪珍(2010)研究低速逆流色譜分離制備蘿卜硫苷，以正丁醇-乙腈-10%硫酸銨溶液(體積比為0.5:1:2.2)為溶劑系統(tǒng)，得到4-甲基亞擴(kuò)醜基-3-丁稀基硫代葡萄糖昔(蘿卜硫苷)組分，簡(jiǎn)單的脫鹽脫色即可得到蘿卜硫苦單體，純度達(dá)95%以上。Du等(2005)利用低速逆流色譜法分離純化苦杏仁苷，溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-丁醇(7K)為1:2，得到苦杏仁苷的純度為94.1%。低速逆流色譜技術(shù)在化學(xué)成分分離有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：1.無(wú)固態(tài)支撐，不吸附樣品，特別適用于分離極性物質(zhì)和具有生物活性的物質(zhì)；2.處理樣品的量大，樣品處理簡(jiǎn)單，能實(shí)現(xiàn)從微克、微升量級(jí)的分析分離到數(shù)克、上百毫克量級(jí)的制備提純；3.樣品易富集，易回收，無(wú)污染；4.節(jié)約溶劑，節(jié)約時(shí)間，耗費(fèi)低；5.可采用多種多樣的溶劑系統(tǒng)。SRCCC也有不足之處，如檢測(cè)限較低，靈敏度差等，且儀器使用成本高。 www.csnutilities.com 上禾生物 |
