超聲法提取厚樸中厚樸酚及和厚樸酚（厚樸提取物）的研究 | 超聲法提取厚樸中厚樸酚及和厚樸酚（厚樸提取物）的研究 |
| 發(fā)布時間:2013-11-22 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):1742 |
摘 要:本文進(jìn)行了超聲法提取厚樸中厚樸酚及和厚樸酚的研究，研究結(jié)果表明：用超聲強度中等、酒精度100％、提取時間為24h以及料液比1：40的提取條件可很好地提取厚樸藥材中的厚樸酚及和厚樸酚。厚樸酚、和厚樸酚以及總酚的提取率分別為95．45％、79．46％和89．57％。RP—HPLC方法較好，結(jié)果理想. 關(guān)鍵詞:厚樸酚 和厚樸酚 超聲法 RP-HPLC 含量 厚樸提取物 上禾生物 www.csnutilities.com 厚樸為木蘭科植物厚樸(Magnolia offci,~lis Rend et Wils)的干皮、根皮或枝皮，性溫味苦辛，無毒，人脾、胃、大腸經(jīng)，能溫中下氣，燥濕消痰。厚樸 在我國已有兩千多年藥用歷史，用于治療多個系統(tǒng)和器官的疾病，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，厚樸具有抗 菌、抗病毒、抗過敏、影響胃腸活動、肌肉松弛和中樞抑制等作用. 厚樸藥材中含酚性化合物9種，揮發(fā)油成分30 種，生物堿9種以及其它一些化學(xué)成分。其中，厚樸酚及其異構(gòu)體和樸酚占絕對優(yōu)勢，這兩種酚也是 起厚樸中起主要藥理作用的化合物。目前有很多提取這二種化合物的方法(工藝)的文獻(xiàn)報道，尚沒 有用超聲法提取厚樸酚以及和厚樸酚的報道。 本研究利用正交試驗，進(jìn)行了超聲法提取厚樸中厚樸酚及和厚樸酚的研究，結(jié)果理想，報告如下。 1 材料與方法 1．1 材料與試劑 厚樸皮取自湖北恩施市雙河鄉(xiāng)，為紫油厚樸的干燥發(fā)汗樹皮。提取用無水乙醇、 甲醇為分析純，HPLC甲醇為色譜純，厚樸酚、和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所提供。 1．2 儀器 JY96一Ⅱ超聲波細(xì)胞粉碎機；美國DI— ONEX公司P680LPG型高效液相色譜儀；RE一52型 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。 1．3 方法 1．3．1 厚樸皮中酚類物質(zhì)的全提�。喝「稍锏陌l(fā) 汗厚樸皮，粉碎，過60目篩，取適量用無水乙醇于索 氏抽提器中提取至無色為止；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后 定容，取樣用甲醇稀釋l0倍后進(jìn)行HPLC測定含 量，三次重復(fù)。 1．3．2 厚樸皮中酚類物質(zhì)的超聲提取：采用正交 實驗L。(3 )進(jìn)行超聲提取厚樸藥材中厚樸酚及和 厚樸酚方的研究，正交實驗的因素水平表見表1；提 取過程中進(jìn)行磁力攪拌，提取結(jié)束后過濾、3次淋洗、濃縮及定容取樣，用甲醇稀釋后進(jìn)行HPLC測定 含量。 表1 因素水平表
1．3．3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱：C (250mm×4．6 mm，5 m)，流動相：甲醇一水一冰醋酸 (85：15：0．25)，流速：1．0 ml／min，檢測波長：294 nm，柱溫：23℃ ，進(jìn)樣量：20 l。 1．3．4 線性范圍考察：精密稱取厚樸酚、和厚樸酚 對照品適量，加甲醇制成每1 ml含厚樸酚以及和厚 樸酚均為400，200，100，50，25，12．5，6．25 IJ,g的標(biāo) 準(zhǔn)品濃度梯度，分別吸取溶液20 l，注入HPLC儀 測定。以對照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。 1．3．5 精密度試驗：取厚樸酚以及和厚樸酚濃度 為100 IJ,g／ml的對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色 譜峰面積，計算RSD。 1．3．6 重復(fù)性試驗：取索氏提取的一個樣品，依法 平行測定5次，記錄厚樸酚與和厚樸酚的色譜峰面 積，計算RSD。 1．3．7 穩(wěn)定性試驗：取索氏提取的一個樣品，每隔 2 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣5次，考察供試品溶液的穩(wěn)定 性。 1．3．8 回收率試驗：取已測知含量的樣品5份，分 別精密加入對照品適量，依RP—HPLC法測定，計算 回收率。 2 結(jié)果 2．1 HPLC結(jié)果及標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系 在前述色譜條件下，厚樸酚與和厚樸酚與其他成分能夠很好地 分離；以對照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。厚樸酚濃度在6．25 ～ 400 Ixg／ml和厚樸酚濃度在6．25—400 Ixg／ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。回歸方程為：厚樸酚 Y：0．435991X+3．423161，R：0．999694；和厚樸酚 Y ：0．609061X +4．516839，R：0．999526。 2．2 超聲提取正交實驗結(jié)果 見表2。各因素對 和厚樸酚提取的重要性為C>A>D>B，對厚樸酚 提取的重要性為A>C>D>B，對總酚提取的重要 性為C>A>D>B；綜合考慮，超聲提的最優(yōu)方法為：超聲強度中等，酒精度100％ ，提取時間為24 h， 料液比l：40。 2．3 優(yōu)選提取方法的驗證 采用上述最優(yōu)方法提取3次，厚樸酚、和厚樸酚以及總酚的提取率分別為 95．45％、79．46％和89．57％，表明本方法的提取效 果較好。 2．4 精密度試驗結(jié)果 取厚樸酚以及和厚樸酚濃 度為100 g／ml的對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄 色譜峰面積，計算得厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別 為0．7l％ ，1．16％ 。 2．5 重復(fù)性試驗 取索氏提取的一個樣品，依法平行測定5次，記錄厚樸酚與和厚樸酚的色譜峰面積，計算得厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為 0．91％ ，1．23％ 。 2．6 穩(wěn)定性試驗 取索氏提取的一個樣品，每隔2 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣5次，結(jié)果供試品溶液在10 h內(nèi) 穩(wěn)定，厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為1．07％， 1．32％ 。 2．7 回收率試驗 取已測知含量的樣品5份，分 別精密加入對照品適量，依RP—HPLC法測定，結(jié)果 和厚樸酚的平均回收率為99．69％，RSD為I．2l％； 厚樸酚的平均回收率為100．63％ ，RSD為1．37％；本研究的RP—HPLC測定法的回收率較好，方法是可行的。 超聲提取正交實驗結(jié)果
3 討論 3．1 厚樸是一種應(yīng)用較廣的重要中藥材，最近的 研究表明，其中厚樸酚 與和厚樸酚 有抑制癌細(xì) 胞的潛能，厚樸藥材將會有更加廣泛的醫(yī)藥用途；本文首次報道了用超聲法提取厚樸藥材中的厚樸酚與 和厚樸酚的研究，超聲有助于厚樸酚與和厚樸酚的提取，適用于工業(yè)化生產(chǎn)的放大工藝正在進(jìn)一步研 究中。 3．2 筆者考察了十多種測定厚樸皮的RP．HPLC 條件(結(jié)果另文報道)，以本文報道的色譜條件最 優(yōu)，比藥典2005年版介紹的方法理想；不僅分離效 果、重復(fù)性、穩(wěn)定性等指標(biāo)理想，而且省時經(jīng)濟，測定 一個樣品只需l3～15 min，藥典2005年版介紹的方 法則需要近35 min 上禾生物 www.csnutilities.com |
