山楂精降脂片及其原料熊果酸含量的研究 | 山楂精降脂片及其原料熊果酸含量的研究 |
| 發(fā)布時(shí)間:2013-12-09 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):1542 |
福建匯天生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的山楂精降脂片是以北山楂為原料，經(jīng)醇提酸解得山楂提取物。再加適量輔料制成的純中藥制劑，主要有效成份有黃酮類的槲皮素、金絲桃甙、表兒茶精等，三萜酸類的熊果酸、山楂酸、齊墩果酸等。中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第九冊收載的山楂精降脂片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，主要質(zhì)量控制指標(biāo)是以槲皮素作對照品，采用比色法測定總黃酮含量。但該方法存在專屬性及準(zhǔn)確性較差。不能很好地體現(xiàn)山楂精降脂片的質(zhì)量控制。熊果酸的降脂、降壓、抗心律失常等藥理作用明確。公司參照高效相液法測定山楂中熊果酸含量的相關(guān)文獻(xiàn)，通過反復(fù)試驗(yàn)，制訂了可行的山楂精降脂片及山楂提取物的熊果酸含量的測定方法。為山楂精降脂片及其原料山楂提取物的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)提高提供依據(jù)。 l 儀器與試藥 1．1 儀器高效液相色譜儀，Lc10ATVP(日本島津)；紫外分光光度計(jì)，uv一2401PC(日本島津)；N2000型色譜工作站，浙江大學(xué)智能信息工程研究所。 1．2 試藥熊果酸。批號：110742—200516，中國藥品生物制品檢定所提供：山楂精提取物、山楂精降脂片。福建匯天生物藥業(yè)有限公司提供；山楂精降脂片(060108批號)，寧夏啟元藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；流動相用甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑和試藥均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2．1 色譜條件色譜柱：Hypersil BDS Cl8(4．6X 250mm)：流動相：乙腈一甲醇一0．6％醋酸銨(68：12：20)；流速為1．0mL· min一1；靈敏度；0．01AUFS。 2．2 溶液制備 2．2．1 熊果酸對照品溶液制備：精密稱取熊果酸對照品約10mg。用適量甲醇溶液溶解，置100mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。 2．2．2 山楂精降脂片溶液制備：取成品10片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約平均片重的1．5倍)，置索氏提取器。于80．100℃ 水浴中，用甲醇回流提取3h，提取液置 50mL容量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。 2．2．3 山楂提取物溶液制備：精密稱取山楂提取物約90mg，置索氏提取器，于80℃一100℃水浴中，用甲醇回流提取3h，提取液置50mL容量瓶中，加甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。 2．2．4 陰性對照溶液制備：按山楂精降脂片處方比例配制 (山楂提取物除外)，稱取適量，按山楂精降指片溶液制備方法制備。 2．3 測定波長的選擇取0．1mg·mLI1的熊果酸對照品溶液。以甲醇為空白，用紫外可見光掃描儀，于200～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。從光譜圖上可見熊果酸在210nm 處有最大吸收峰，因此選擇210nm為檢測波長。 2．4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取熊果酸對照品溶液、山楂提取物溶液、山楂精降脂片溶液、陰性對照溶夜各1O止，注入色譜儀。在上述條件下測定，記錄各色譜圖(見圖1)。結(jié)果顯示， 熊果酸對照品溶液、山楂提取物溶液、山楂精降脂片溶液的熊果酸峰保留時(shí)間分別為：15．748、15．432、15．382min基本一致；理論塔板數(shù)分別為：14187，13758，14010；山楂提取物及山楂精降脂片的熊果酸與其他相鄰組分分離良好，分別為： 1．626、1．813；缺山楂提取物的陰性對照溶液在熊果酸位置處無色譜峰，說明山楂精降脂片處方中各輔料對熊果酸測定無影響。 2．5 線性研究精密稱取熊果酸對照品15．05mg。用甲醇溶液溶解，置50mL容量瓶中，用甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，得 0．30mg·mL-1對照品貯備液。精密量取上述貯備液1．4、 2．7,3．4、4、5mL分別置10mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度。搖勻，即得線性研究供試品溶液。量取上述供試品溶液各10pL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，記錄主峰面積，以進(jìn)樣量( g)與峰面積作回歸計(jì)算，得熊果酸線性回歸方程：Y= 572485．1-2312．9X，r=0．9993，結(jié)果表明。熊果酸在0．422～ 1．505~g范圍內(nèi)。線性關(guān)系良好。 2．6 精密度試驗(yàn) 取熊果酸對照品溶液10 ，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及熊果酸峰面積，連續(xù)進(jìn)樣6次，RSD為 1．07％，表明本方法測定熊果酸精密度良好。 2．7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 2．7．1 山楂提取物穩(wěn)定性試驗(yàn)：取批號為080104的山楂提取物約90mg，按山楂提取物溶液制備方法制備，分別于0、3、 6．9、12、24h取樣品10 L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及熊果酸峰面積，RSD為1．76％。表明樣品在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。 2．7．2 山楂精降脂片穩(wěn)定性試驗(yàn)：取批號為080102的成品山楂精降脂片l0片，按山楂精降脂片溶液制備方法制備．分別于0、3、6、9、12、24h取樣品1O L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及熊果酸峰面積，RSD為1．31％，表明樣品在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。 2。8 重復(fù)性試驗(yàn) 2．8．1 山楂提取物重復(fù)性試驗(yàn)：取山楂提取物(批號 070802)，按山楂提取物溶液制備方法制備6份。各取樣品 1O止，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及熊果酸峰面積，結(jié)果平均含量為47．27 g·mg～ ，RSD 為1．78％。表明此方法重復(fù)性良好。 2．8．2 山楂精降脂片穩(wěn)定性試驗(yàn)：取成品山楂精降脂片(批號070702)，按山楂精降脂片溶液制備方法制備6份，各取樣品10 L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及熊果酸峰面積，結(jié)果平均含量為21．40 g·mg一。RSD為1．67％。表明此方法重復(fù)性良好。 2．9 加樣回收試驗(yàn) 2．9．1 山楂提取物加樣回收試驗(yàn)：取山楂提取物(批號 080104，熊果酸含量5．0％)，精密稱取約90mg，同時(shí)加入熊果酸3．28mg(精密稱取熊果酸對照品20．52mg，用甲醇定容于25mL容量瓶中，每份供試品中加入4mL，即3．28mg)，按山楂提取物溶液制備方法進(jìn)行制備，重復(fù)制備6份，各取樣品 1O止，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及熊果酸峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果(見表1)。表明此方法測定山楂提取物熊果酸含量。熊果酸基本沒有損失。 2．9．2 山楂精降脂片加樣回收試驗(yàn)：取成品山楂精降脂片 (批號080102，熊果酸含量4．00rag／片)，精密稱取約平均片重的1．5倍量，置索氏提取器，精密加入熊果酸2．71mg后 (精密稱取熊果酸對照品22．60mg。用甲醇定容于25mL容量瓶中，每份供試品中加入3mL，即2．71mg)，按山楂精降脂片溶液制備方法制備，重復(fù)制備6份，各取樣品lO~tL。注入液相色譜儀，記錄色譜圖及熊果酸峰面積，并計(jì)算回收率，結(jié)果表明此方法測定山楂精降脂片熊果酸含量。熊果酸基本沒有損失。 2．10 含量測定 2．10．1 山楂提取物含量測定：取不同生產(chǎn)日期的山楂提取物l0批，測定熊果酸含量，結(jié)果(見表3)。 2．10．2 山楂精降脂片含量測定：取10批不同生產(chǎn)批號山楂精降脂片，以及寧夏啟元藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的批號為060108 的山楂精降脂片測定熊果酸含量。 3 討論 3．1 指標(biāo)成分的選擇以槲皮素作對照品，采用比色法測定總黃酮含量，山楂精降脂片的總黃酮含量在4．5mg／片以上，山楂提取物的總黃酮含量在8．0％以上；根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道山楂黃酮類物質(zhì)主要有槲皮素、金絲桃苷、牡荊素等，我們根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的液相色譜含量測定方法，結(jié)果山楂精降脂片中的槲皮素、金絲桃苷、牡荊素的含量都很低、分離度不好，不適合做為質(zhì)量控制指標(biāo)；熊果酸作為山楂中三萜酸類主要成分，藥理作用明確，液相色譜法測定含量的文獻(xiàn)報(bào)道也比較多。經(jīng)過試驗(yàn)我們認(rèn)為采用熊果酸作為山楂精降脂片及其原料山楂提取物質(zhì)量控制指標(biāo)是比較科學(xué)的。 3．2 色譜條件的選擇根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道。我們試驗(yàn)了不同色譜柱和不同流動相，試驗(yàn)結(jié)果表明，黃秋妹、李宗在 (HPLC法測定山楂中熊果酸和齊墩果酸的含量>一文中報(bào)道的色譜柱為Hypersil BDS C18(4．6×250mm)、乙腈一甲醇一 0．5％醋酸銨(67：12：21)為流動相的色譜條件的熊果酸的分離效果較好，在此方法基礎(chǔ)上我們對流動相進(jìn)行優(yōu)化，最終確定為乙腈一甲醇一0．6％醋酸銨(68：12：20)。 3．3 不同生產(chǎn)單位山楂精降脂片熊果酸含量的差異我們對比了寧夏啟元藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的山楂精降脂片的熊果酸含量。其含量為2．85mg／片，與丁建寶[7 等報(bào)道的2．58mg／片的熊果酸含量水平基本一致；福建匯天生物藥業(yè)有限公司的 3．68／片的熊果酸含量水平，要比其高近30％。 3．4 本方法測定山楂精降脂片及山楂提取物中熊果酸含量，具有分離效果好、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，可做為山楂精降脂片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的試驗(yàn)依據(jù)。 |
