齊墩果酸又名慶四素，是一種五環(huán)三萜類化合物，以游離體和配糖體的形式廣泛存在于許多植物中，是一種天然產(chǎn)物化學(xué)成分。并己證實(shí)其具有多種生物活性。純齊墩果酸是白色簇狀結(jié)晶，無色，無味，無臭，熔點(diǎn)為308~31O~C，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿等有機(jī)溶劑。比旋度[a]+79． 5。。據(jù)研究證實(shí)，齊墩果酸具有消炎抑菌、增強(qiáng)免疫功能、降轉(zhuǎn)氨酶、降濁，改善病狀和肝功能，糾正體內(nèi)異常蛋白代謝，防止肝硬化、降血糖、降血脂等多方面的臨床藥理作用，它對(duì)急性黃疸型肝炎和慢性病毒性肝炎療效顯著，是國內(nèi)研制的保肝、治療肝炎的有效藥物之一。此外，齊墩果酸還具有抗血栓形成、抗突變、抗艾滋病、抑制HIV—I的復(fù)制作用；以及強(qiáng)心、利尿和抑制S180瘤株生長等作用，其毒性小，副作用低，安全范圍大。齊墩果酸還因其有抗衰老、抗突變、清除自由基的作用，還可以作為化妝品成分被廣泛應(yīng)用。
女貞子為木犀科植物女貞的干燥成熟果實(shí)。為常用的扶正固本中藥，藥理研究表明其具有促進(jìn)免疫的主要有效成分為齊墩果酸、熊果酸及乙酰齊墩果酸。齊墩果酸以游離態(tài)的形式同存于女貞子中，含量較高，其齊墩果酸含量以幼果期(8月)含量最高，可高達(dá)8．04％，隨著發(fā)育成熟下降到2．5％左右；其在果實(shí)中的含量分布為外中果皮>全果實(shí)>肉果皮>種仁。女貞子中還含D一甘露醇、硬脂酸、植物蠟等。由于齊墩果酸的結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，人工合成步驟較為繁瑣，目前仍主要依賴于從植物中提取。探索從女貞子中提取齊墩果酸的方法具有研究價(jià)值。通常采用回流提取法、水蒸氣蒸餾提取法、索氏提取法從女貞子中提取齊墩果酸，效果均不理想。本文采用堿溶鹽析法提取，得到了較高的提取效率。
一、材料及實(shí)驗(yàn)儀器、試劑
(1)材料：市售中藥女貞子；(2)實(shí)驗(yàn)儀器：真空干燥箱，中藥粉碎機(jī)，電子天平，紅外光譜儀(天津港東WGH-30／6型)。(3) 試劑：乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑；濃鹽酸(95％)；NaOH固體等均為化學(xué)純。
二、試驗(yàn)流程
分離提純一純度檢驗(yàn)一分子式確定一結(jié)構(gòu)確定一性能研究。原料選擇一實(shí)驗(yàn)材料處理(真空干燥、粉碎)一分離提純：按最佳工藝條件進(jìn)行提取一提取液(活性炭脫色，回收溶劑)一浸膏(加水混懸，再加入等量乙醚)一萃取三次，合并乙醚層(回收乙醚)一殘?jiān)?95％乙醇定容)一待測(cè)液一純度檢驗(yàn)：測(cè)物理常數(shù)、薄層層析一色譜分析一結(jié)構(gòu)分析。
三、各種提取方法對(duì)比
1．實(shí)驗(yàn)材料篩選及處理。女貞子從藥物市場(chǎng)購得，經(jīng)植物鑒定確認(rèn)。取女貞子除雜，用中藥粉碎機(jī)粉碎為粗粉(注意樣品粒度對(duì)提取效果的影響，樣品顆粒越小，齊墩果酸提取越充分。隨著粉碎度的提高，提取分離及去雜難度也會(huì)隨之增加。
2．提取方法
(1)回流提取法。用95％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，過濾。濾液靜置數(shù)小時(shí)后，濾去析出結(jié)晶物。母液回收部分乙醇后，放置，再濾取析出結(jié)晶物(堿溶酸沉法)。將結(jié)晶物用含1％氫氧化鈉的稀乙醇溶液加熱溶解，過濾，濾液滴加氯仿呈現(xiàn)渾濁后放置，結(jié)晶幾乎無析出，無法濾集。
(2)索氏提取法。原理：通過對(duì)溶劑加熱回流及虹吸現(xiàn)象，使固體物質(zhì)每次均被新的溶劑萃取。此連續(xù)萃取裝置效率高，節(jié)約溶劑，對(duì)受熱易分解或變色的物質(zhì)不宜采用，高沸點(diǎn)溶劑采用此法進(jìn)行萃取也不合適。
第一，乙醇浸出。女貞子粗粉經(jīng)真空干燥后用3倍量95％乙醇在索氏提取柱中提取，至虹吸下提取液近無色(約8h)，加水稀釋時(shí)無明顯白色析出物表明齊墩果酸已大部分被浸出。提取液蒸餾，回收乙醇，得乙醇稠浸膏。
第二、乙醇浸出水洗。乙醇稠浸膏投入敞口夾層蒸發(fā)鍋，加熱蒸去余下的乙醇，然后加水?dāng)嚢柚蠓衅蹋爬�，用虹吸管去除水溶液，重�?fù)水洗l～2次，至水洗液顏色變淺為止。
第三，水不溶物堿化去雜質(zhì)。將此水不溶物再用乙醇溶解，加IO％NaOH調(diào)pH=l，加活性炭脫色，放置、過濾，并向?yàn)V液中加入鹽酸酸化調(diào)pH=l，放置無析出物，故提取效果不理想。 (3)水蒸氣蒸餾提取法。儀器：三口燒瓶(斜口)、溫度計(jì)套管、溫度計(jì)(150℃)，蒸餾頭，直行冷凝管，具支尾接管。操作：架裝置：水蒸氣蒸餾裝置(水蒸氣發(fā)生器、蒸餾部分、冷凝部分、接收器)一加熱制蒸汽一蒸餾一收集餾分一分液一干燥。此法與回流提取法效果差不多，均不理想，提取濾液中均無結(jié)晶析出。
3．堿溶鹽析法。堿溶：取女貞子粗粉lOg，加入新配制的 NaOH液(1mol／L)80 m1，控制油浴溫度為85℃煮40min，趁熱過濾，重復(fù)三次。堿液逐漸色淡：第一次堿液呈紅褐色，第二次呈黃褐色，第三次呈亮黃色。表明有機(jī)酸鈉鹽、褐色色素、鞣質(zhì)等保留在堿液中。經(jīng)過濾可將沉淀與含有雜質(zhì)的濾液分開。鹽析：隨后加入市售食鹽60g，冷至室溫，此時(shí)已溶于水的齊墩果酸鈉鹽又重新沉淀析出，而純化的齊墩果酸鈉鹽再溶于水，用濃鹽酸酸化至pH=l后，即析出淺黃色結(jié)晶，再濾集結(jié)晶用沸蒸餾水洗4～5次，至用硝酸銀鑒別無氯離子，在紫外燈下烘干得到白色齊墩果酸成品。其中夾雜有淺黃色物質(zhì)，疑為種皮中的纖維素類物質(zhì)。
4．齊墩果酸的定‘眭分析。薄層色譜鑒別：取試樣約0．Olg，加入95％乙醇Iml溶解，用毛細(xì)管取微量試液滴于硅膠層析板上，展開劑為乙醚：乙醇=95：5。在紫外燈下烘干后，碘顯。與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，樣點(diǎn)外觀顏色相近，均稱紫色。比移值相對(duì)接近。由此表明，產(chǎn)品中齊墩果酸含量較高。 5．紅外光譜分析。取少量晶體，用KBr壓片制樣進(jìn)行紅外光譜測(cè)定，將譜圖的特征吸收峰與標(biāo)準(zhǔn)樣譜圖最對(duì)比。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
1．不同提取方法的比較。本實(shí)驗(yàn)分別采用95％乙醇和 lmol／LNa0H液作提取劑，測(cè)定不同提取方法下齊墩果酸的提取效率。結(jié)果表明：采用堿溶鹽析法的提取效率最高。
2．紅外光譜分析。分子式C30H4803的不飽和度UN=(3O+1) 一48／2=7，UN>4，可能有苯環(huán)存在。以下附有樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜圖，經(jīng)對(duì)比分析：在波數(shù)3404cm 、1637 cm、1402 cm處的吸收峰說明有類似苯環(huán)的結(jié)構(gòu)存在；在波數(shù)1637cm，1402cm 處有吸收峰，為苯環(huán)的骨架振動(dòng)；在波數(shù)3404cm處有強(qiáng)吸收峰，說明有一0H存在。上述為幾個(gè)較為顯著的特征峰，其余峰不明顯，可能受到產(chǎn)品中其他雜質(zhì)的干擾產(chǎn)生峰的遷移。再根據(jù) 齊墩果酸的結(jié)構(gòu)式，由此，鑒定該白色晶體化合物為齊墩果酸。
五、總結(jié)
從女貞子中提取齊墩果酸，其產(chǎn)率主要決定于它在提取劑中的溶解性能。本實(shí)驗(yàn)探究得到其在乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑中溶解性能并不理想，致使產(chǎn)率較低。此外，從果實(shí)粗粉和果皮粗粉中的提取效率也有較大差異。果實(shí)中包含的種皮含有大量油性物質(zhì)，致使抽濾較為困難。若換為果皮粗粉，則可避免大量油性物質(zhì)的干擾，且據(jù)文獻(xiàn)記載果皮中齊墩果酸含量最高，可高達(dá)8％左右，故提取時(shí)應(yīng)先將果皮分離出來再進(jìn)行提取可得到較好的實(shí)驗(yàn)效果。 | 
堿溶鹽析法從女貞子中提取齊墩果酸 
