芹菜素改善D-半乳糖衰老模型小鼠衰老指征的研究 | 芹菜素改善D-半乳糖衰老模型小鼠衰老指征的研究 |
| 發(fā)布時間:2013-12-11 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):1645 |
摘 要:目的：觀察芹菜素對D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老模型小鼠的影響。方法：建立D-半乳糖致小鼠衰老模型，以Y型電迷宮檢測其學(xué)習(xí)記憶能力，分別采用黃嘌呤氧化酶法、TBA比色法測定大腦超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，觀察小鼠服用不同劑量芹菜素后上述指標(biāo)的變化。結(jié)果：芹菜素低、中、高劑量均可顯著提高衰老模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力（P〈0．05或P〈0．01），顯著增加口半乳糖所致衰老模型小鼠大腦SOD活性、降低MDA含量（P〈0．05或P〈0．01）。結(jié)論：芹菜素能改善口半乳糖所致衰老小鼠的多項體征。 關(guān)鍵詞:芹菜素 半乳糖 衰老 學(xué)習(xí)障礙 記憶障礙 芹菜素(apigenin)，又稱芹黃素，化學(xué)結(jié)構(gòu)為5，7，4 三羥 基黃酮，是芹菜中的主要生物活性成分，廣泛存在于多種水 果、蔬菜、豆類和茶葉中。研究發(fā)現(xiàn)它具有神經(jīng)保護、抗氧化、 自由基清除劑、抗腫瘤、抗炎、碳水化合物代謝促進因子、免疫 調(diào)節(jié)劑等作用，并且與其他黃酮類物質(zhì)(槲皮素、山奈黃酮)相 比具有低毒、無誘變性等特點I1]。隨著對芹菜素研究的深入， 大量實驗表明芹菜素是一種抗氧化和抗脂質(zhì)過氧化作用的天 然存在的黃酮類化合物I2]。本研究觀察了芹菜素對 半乳糖 所致衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶、大腦超氧化物歧化酶(S0D)活 性及丙二醛(MDA)含量的影響，探討其抗衰老作用。 1 材料和方法 1．1 藥品與試劑 芹菜素,吡拉西坦片(腦復(fù)康片)：揚州市星斗藥業(yè)有限 公司生產(chǎn)(批號：020901)；D-半乳糖(D-ga1)；SOD、MDA檢測試劑盒 1．2 D-半乳糖衰老小鼠模型的建立 健康成年ICR小鼠 6O只，雌雄各半，體質(zhì)量18～20 g，由南通大學(xué)實驗動物中心 提供。隨機分為6組：① D-gal+ 芹菜素低劑量組； ② gal+芹菜素中劑量組；③D-gal+ 芹菜素高劑量組；④ D-gal+腦復(fù)康組；⑤ D-gal組；⑥ 正常對照組。① 、② 、③ 、 ④ 、⑤ 組小鼠每日頸背部皮下注射5 D-gal(0．25 ml／ 1O g)，連續(xù)注射6周建立衰老動物模型；其中① 、② 、③ 、④ 組小鼠于第3周分別每日灌胃給藥芹菜素350 mg／kg、700 mg／kg、1 400 mg／kg及腦復(fù)康6．2 mg／10 g；⑤ 組小鼠給予 等量雙蒸水；⑥ 組小鼠頸背部皮下注射等量生理鹽水并于第 3周給予等量雙蒸水作為非模型正常對照組。 1．3 衰老指征評定 1．3．1 Y迷宮分辨學(xué)習(xí)記憶能力檢測 Y迷宮為三等分 輻射式反射箱。以小鼠被電擊后逃至安全區(qū)為一次正確反 應(yīng)，連續(xù)1O次測試中有9次(90 )正確反應(yīng)，定為學(xué)會標(biāo) 準(zhǔn) 記錄各實驗組和對照組每只小鼠達(dá)到學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)的訓(xùn)練 次數(shù)。 1．3．2 大腦SOD 活性測定 小鼠斷頭處死，迅速取大腦組 織，加入適量組織勻漿液，在冰浴中勻漿，采用Bradford法測 定總蛋白含量。取1 大腦組織勻漿液，采用黃嘌呤氧化酶 法(SOD檢測試劑盒)，于波長550 nm處分別測定各實驗組 和對照組小鼠大腦組織勻漿液的光密度(D)值。 1．3．3 大腦MDA含量測定 小鼠大腦組織蛋白勻漿和定 量方法同上。采用TBA 比色法(MDA檢測試劑盒)，于波長 532 nm處分別測定各實驗組和對照組小鼠大腦組織勻漿液 的D值。 1．4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SATAR 7．0統(tǒng)計分析軟件對實驗 結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，兩兩比較采用t檢驗。 2 結(jié) 果 2．1 芹菜素對 半乳糖衰老模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力影 響 由表1可見，與正常對照組相比， 半乳糖造模6周后， 模型組小鼠達(dá)到學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)所訓(xùn)練的次數(shù)明顯增加(P< 0．01)，而芹菜素低、中、高劑量組小鼠達(dá)到學(xué)會標(biāo)準(zhǔn)所訓(xùn)練 的次數(shù)明顯低于模型組(P<O．05或P<O．O1)。< P> 表1 芹菜素對上)-半乳糖衰老 模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響
P<O．05，一P<O．01與D-GAL組比較< P> 2．2 芹菜素對I)．半乳糖所致衰老模型小鼠大腦組織SOD 活性、MDA含量的影響 如表2所示，與正常對照組相比， I)．半乳糖造模6周后，模型組小鼠大腦組織SOD的活性顯 著降低(P<0．01)，而MDA的含量卻明顯升高(P<0．01)。 與模型組相比，芹菜素低、中、高劑量均可使小鼠大腦組織 SOD活性明顯增加(P< 0．05或<0．01)、MDA含量明顯降 低(P< 0．05或<0．01)。 表2 芹菜素對上)-半乳糖衰老模型 小鼠腦SOD活性和MDA含量的影響
P<0．05，一P<0．01與D—gal組比較 3 討論 I)．半乳糖致衰老模型是基于衰老代謝學(xué)說而復(fù)制的一 種衰老模型，具有與自然衰老相似的自由基代謝紊亂特征， 其衰老反應(yīng)接近或相當(dāng)于自然衰老[5]。I)．半乳糖可在體內(nèi) 氧化產(chǎn)生大量自由基，從而引起脂質(zhì)過氧化作用的鏈?zhǔn)椒?應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞膜損傷。同時過氧化脂質(zhì)(LPO)的分解終產(chǎn)物 如MDA可與DNA或RNA及蛋白質(zhì)和磷脂的有關(guān)物質(zhì)結(jié) 合，使細(xì)胞膜成分改變、功能障礙，促進衰老。同時其脂質(zhì)過 氧化終產(chǎn)物如MDA 可引起精神行為改變，并通過交聯(lián)、結(jié) 合形成脂褐質(zhì)，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)的障礙。研究表明，MDA含量 隨年齡的增加而增高，而SOD活性卻隨年齡的增加而降低。 SOD在保護心腦功能、延緩衰老方面具有重要的作用。SOD 活性與物種壽命呈正相關(guān)。本研究結(jié)果證實半乳糖造模 組小鼠的學(xué)習(xí)記憶力下降、大腦s0D活力降低，而MDA含 量卻明顯升高，表現(xiàn)出明顯的衰老特征. 以往研究表明芹菜素是一種抗氧化和抗脂質(zhì)過氧化作 用的天然存在的黃酮類化合物。神經(jīng)系統(tǒng)富含不飽和脂肪 酸和鐵，這種脂類的氧化代謝活動需要氧和鐵離子的參與。 研究發(fā)現(xiàn)在阿爾茨海默病(Alzheimer’S disease，AD)患者的 大腦中可見脂質(zhì)過氧化和鐵離子濃度的上升。Sugihara 等 研究證實了芹菜素對鐵依賴脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有明顯的 抑制作用。芹菜素是一種很強的金屬離子螯合劑(例如鐵和 銅離子)，它可以通過螯合作用降低金屬離子參與的自由基 反應(yīng)，減少氧自由基的生成。研究發(fā)現(xiàn)芹菜素對氧自由基、 NO 自由基、超氧陰離子自由基等均有一定的清除作用。芹 菜素在SH—SY5Y細(xì)胞中可抑制導(dǎo)致細(xì)胞死亡的氧化作用， 從而體現(xiàn)了神經(jīng)保護的作用[9]。生物胺集中在神經(jīng)組織中，芹菜素通過抑制A 型單胺氧化酶(type A monoamine oxi— dase，MAO-A)的活性達(dá)到抗氧化效應(yīng)，介導(dǎo)單胺的分解代 謝達(dá)到神經(jīng)保護的作用 ]。AD發(fā)病與p淀粉樣蛋白前體 基因變異有關(guān)，此蛋白質(zhì)異常對神經(jīng)元有毒性作用，致腦神 經(jīng)退化或漸進死亡。動物細(xì)胞試驗發(fā)現(xiàn)，自中草藥中提煉出 的山萘酚，可通過抗氧化作用保護腦神經(jīng)細(xì)胞免于Ap的毒 害，對AD中AB前體基因的表達(dá)沒有影響；如果再加上另兩 種植物性雌激素芹菜素及槲皮素，抗氧化效果會倍增，可減 少反應(yīng)性氧化物對腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷。 本研究結(jié)果表明，芹菜素可顯著改善I)．半乳糖衰老模 型小鼠的衰老指征，使I)．半乳糖衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能 力提高，大腦s0D活性增加，而MDA 含量下降。這提示芹 菜素具有抗衰老作用，值得進一步研究。 |
