阿霉素(Adriamycin，ADR)屬于葸環(huán)類抗生素，廣泛應(yīng)用于 急、慢性白血病，淋巴瘤以及各種實(shí)體瘤的治療過(guò)程中。但是， 隨著阿霉素使用的增加，急慢心肌損傷成為其l臨床應(yīng)用的主要 障礙” ]。芹菜素(Apigenin，API)是一種黃酮類化合物，廣泛存在于各種水果、蔬菜和某些植物中，具有神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、清除 自由基、抗腫瘤、抗炎、免疫凋節(jié)等作用。越來(lái)越多的研究提示， 芹菜素可通過(guò)多種途徑發(fā)揮對(duì)心血管系統(tǒng)損傷的保護(hù)作 用 j。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)制備大鼠阿霉素性急性心肌損傷模型，來(lái)觀 察芹菜素在大鼠阿霉索性心肌損傷中發(fā)揮的作用。
1 材料與方法
1．1 材料
1．1．1 實(shí)驗(yàn)藥品、試劑、儀器阿霉素，浙江海正藥業(yè)股份有限 公司(批號(hào)：20081107)；芹菜素，陜西慧科植物開發(fā)有限公司(批 號(hào)：AP20070823)；TLR4免疫組化試劑盒，購(gòu)自武漢博士德生 物工程公司；CK—MB的EI ISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自上海越研生物科技有限公司。顯微鏡及圖形分析系統(tǒng)、多功能酶標(biāo)儀等。
1．1．2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性SD大鼠40只，清潔級(jí)，體重20Og~250 g，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
1．2 方法
1．2．1 動(dòng)物分組及處理 雄性SD大鼠4O只，隨機(jī)分為5組 (每組8只)：CONTROl— ADR、ADR+ API[L]、ADR+API [M]、ADR~API[H]。ADR+API各組于實(shí)驗(yàn)開始的第一天 起每天分別腹腔注射7．5 mg／kg、15 mg／kg、3O mg／kg的芹萊 素，共5 d；CONTROL組和ADR組每天注射等體積的生理鹽 水，共5 d；除CONTROL組外，其他實(shí)驗(yàn)組均于實(shí)驗(yàn)的第6天 一次性腹腔注射15 mg／kg阿霉素。CONTROL組注射等體積 的生理鹽水。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于實(shí)驗(yàn)第8天采血后使用斷頭法 處死。
1．2．2 病理組織學(xué)觀察 剪取部分游離左室壁組織，10 甲醛 固定；常規(guī)石蠟包埋，切片4 fm。取制作好的切片，HE染色，光 鏡下作組織病理學(xué)觀察。
1．2．3 心肌細(xì)胞TLR4的免疫組化檢測(cè) 取制作好的石蠟切 片，常規(guī)脫蠟至水，3 H。O。消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，0．1 胰 蛋白酶進(jìn)行抗原修復(fù)，以TI R4一抗4℃過(guò)夜，二抗室溫孵育，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。免疫組化陽(yáng)性反應(yīng) 為細(xì)胞漿內(nèi)具有棕黃色顆粒沉積。在400倍的視野下，每張切 片隨機(jī)選擇1O個(gè)位點(diǎn)，對(duì)其染色強(qiáng)度進(jìn)行自動(dòng)分析，結(jié)果用灰 度值表示。
1．2．4 血清心肌酶檢測(cè) 嚴(yán)格按照CK—MB的ELISA試劑 盒說(shuō)明操作，按序進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣、溫育、洗滌、加酶、 溫育、洗滌、顯色等。
1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)表示，采用 SPSS 13．0軟件進(jìn)行分析，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分 析，多組間均數(shù)兩兩比較采用Bonferroni方法進(jìn)行。
2 結(jié) 果
2．1 心肌組織光鏡下病理形態(tài)學(xué)觀察 在光鏡下，c()NTROL 組心肌細(xì)胞排列整齊，橫紋清晰可見，細(xì)胞間隙正常；ADR組的 心肌細(xì)胞橫紋模糊消失，心肌纖維出現(xiàn)扭曲、斷裂，細(xì)胞間隙明 顯增寬；ADR+API各組，中劑量、高劑量組心肌損傷表現(xiàn)明顯 改善，心肌纖維斷裂的程度明顯輕于ADR組，而低劑量組表現(xiàn) 不是很明顯。
2．2 心肌細(xì)胞TLR4免疫組化灰度值(GREY)變化 與 CONTROL組比較，ADR組的GREY值明顯降低(P< 0．01)；與 ADR組比較，ADR+ API各組的GREY值升高，ADR+API (L)組的GREY值升高不明顯；ADR+ API(M)與ADR+API (H)兩組的GREY值升高明顯(P<0．01)。詳見表1。
2．3 血清心肌酶CK —MB改變 與C()NTR0L組相比較， ADR組的CK—MB值明顯升高(P< O．01)；與ADR組相比較， ADR+ API各組的CK—MB值降低，ADR+ API(L)組的 CK—MB值降低不明顯；ADR+API(M)與ADR+AI 1f H)兩 組的CK MB值降低明顯(P％0．01)。詳見表1。
3 討 論
阿霉素是一種抗瘤活性強(qiáng)的蒽環(huán)類化療藥物，目前被廣泛 應(yīng)用于多種惡性腫瘤的治療。當(dāng)阿霉素累積量>550 mg／m 時(shí)，心衰發(fā)生率高達(dá)26 ，而使用劑量達(dá)到700 mg／m 時(shí)，心衰 發(fā)生率高達(dá)48 ∞]。探討阿霉素心肌損傷的機(jī)制，并尋求解決 的辦法一直是學(xué)術(shù)界研究的熱點(diǎn)。阿霉素心肌損傷的機(jī)制可能 涉及了多個(gè)方面，包括氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、基因及轉(zhuǎn)錄水平的 改變等l7 。免疫炎性損傷可能在阿霉素心肌損傷中發(fā)揮了重 要作用一 。本實(shí)驗(yàn)采用給大鼠一次性腹腔注射阿霉素15 mg／kg制備阿霉素急性心臟損傷模型_】。，并探討芹菜素低(7．5 mg／kg)、中(15 mg／kg)、高(30 mg／kg)三個(gè)劑量對(duì)阿霉素急性 心臟損傷的影響。給予大鼠一次性腹腔注射阿霉素15 mg／kg 后，ADM 組的大鼠心肌細(xì)胞，出現(xiàn)心肌纖維的扭曲和斷裂，而 且在血清CK—MB、心肌細(xì)胞TLR4免疫組化檢測(cè)方面，ADR組與CONTROL組相比較，差異具有顯著性，表明阿霉素急性 心臟損傷模型制作成功。而在提前給予5 d的芹菜素組，尤其 ADM+API(M)與ADM+API(H)組的各項(xiàng)指標(biāo)均改善明顯， 表明芹菜素可以減輕阿霉素所導(dǎo)致的心肌損傷。TLR4是近幾 年發(fā)現(xiàn)可能參與許多心血管疾病的受體，Alexander等 發(fā)現(xiàn) TLR4基因敲除鼠，其多柔比星所造成的心肌損傷減輕，而且束 進(jìn)等 通過(guò)在體外心肌細(xì)胞培養(yǎng)損傷模型中發(fā)現(xiàn)，多柔比星作 用于乳鼠心肌細(xì)胞2 h、6 h后TLR4表達(dá)明顯增加。本實(shí)驗(yàn)結(jié) 果亦顯示，與CONTROL組相比較，ADR組的TLR4表達(dá)明顯 增高；與ADR組相比較，ADR+API(M)與ADR+API(H)兩 組TLR4的表達(dá)明顯下降，提示阿霉素所導(dǎo)致的心臟損傷可能 與TLR4的過(guò)度表達(dá)有關(guān)。
芹菜素可減輕阿霉素性心肌損傷，可能與其對(duì)心肌細(xì)胞 TLR4表達(dá)的影響有關(guān)，但其確切機(jī)制還有待于深一步研究。 | 
芹菜素(Apigenin，API)對(duì)大鼠阿霉素性心肌損傷的影響 
