【關(guān)鍵詞】 菊花；,,高效液相色譜；,,綠原酸 上禾生物
摘要：目的對(duì)菊花中綠原酸含量的測(cè)定方法進(jìn)行改進(jìn)。方法采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定綠原酸含量。結(jié)果菊花中綠原酸的含量按《中國(guó)藥典》2005年版Ⅰ部方法實(shí)驗(yàn)，樣品提取方法復(fù)雜，含量有損失，誤差較大。結(jié)論 將含量測(cè)定方法改進(jìn)后，具有樣品溶液提取方法簡(jiǎn)便、含量準(zhǔn)確可靠、分離效果好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，為標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供可行的依據(jù)。
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The Improvement in Assaying of the Chlorogenic Acid in Flos Chrysanthemi by HPLC
Abstract：ObjectiveTo improve the method for the assaying of the chlorogenic acid in Flos Chrysanthemi. MethodsWith HPLC the chlorogenic acid was determined. ResultsAccording to CH.P(2005) the method is complicated, sample is drawn, the content has losses, the error is relatively great.ConclusionAfter improvement, it is reliable, simple,convenient, accurate, sensitive, stable for extraction, and it can offer a feasible basis for revision of the standard .
Key words：Flos Chrysanthemi; HPLC; Chlorogenic Acid
菊花為菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序。藥材按產(chǎn)地和加工方法不同，分為“亳菊”“滁菊”“貢菊”“杭菊”。本文分別對(duì)亳菊和杭菊進(jìn)行了含量分析，改進(jìn)后的方法（第2法）具有樣品溶液提取方法簡(jiǎn)便、含量準(zhǔn)確可靠等優(yōu)特點(diǎn)。
1 器材
氯仿、磷酸均為分析純；甲醇、乙腈均為色譜純；Agilent 1100 HPLC化學(xué)工作站；Mettler AE240電子天平；樣品由湖北省宜昌市眾生醫(yī)藥公司和湖北省紅安縣中醫(yī)醫(yī)院提供，經(jīng)宜昌市藥品檢驗(yàn)所鑒定為“杭菊”，湖北某企業(yè)提供的菊花經(jīng)鑒定為“亳菊”；綠原酸對(duì)照品（由中檢所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110753200212）。
2 方法與結(jié)果
2.1 第1法按《中國(guó)藥典》2005年版Ⅰ部方法實(shí)驗(yàn)。
2.1.1 色譜分析條件色譜柱為Nucleosil C18(10 μm,4.6 mm×250 mm)；柱溫25℃；流動(dòng)相：0.1 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液［取磷酸二氫鈉（NaH2PO4・2H2O）15.6 g，加水至1 000 ml，制成0.1 mol/L的溶液，加入磷酸適量，使pH值為2.7］甲醇（70∶30）；檢測(cè)波長(zhǎng)328 nm；進(jìn)樣量20 μl；流速1.0 ml/min；AUFS=0.12s。
2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。
2.1.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末（過1號(hào)篩）約1 g［同時(shí)另取樣品粉末測(cè)定水分（附錄Ⅸ H第1法）］，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流2 h，冷卻，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，蒸干，殘?jiān)勇确? ml，浸漬3 min，棄去氯仿液，殘?jiān)鼡]去氯仿，加水適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得（應(yīng)于當(dāng)日測(cè)定）。
2.2 第2法（改進(jìn)后的方法）
2.2.1 色譜分析條件 流動(dòng)相：乙腈0.4%磷酸溶液（12∶88），其余同第1法。
2.2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得（10℃以下保存）。
2.2.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末約0.5 g［同時(shí)另取樣品粉末測(cè)定水分（附錄Ⅸ H第1法）］，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置25 ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。
2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)
2.3.1 第1法按《中國(guó)藥典》2005年版Ⅰ部方法實(shí)驗(yàn)。理論板數(shù)：本文依法對(duì)樣品和對(duì)照品進(jìn)行了處理，并按上述條件進(jìn)行色譜測(cè)定，其理論板數(shù)為 4 495，符合《中國(guó)藥典》規(guī)定。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取新配制的綠原酸對(duì)照品溶液，進(jìn)樣5次，所得峰面積積分值為 5 753，5 748，5 747，5 750，5 747，RSD= 0.04% (n=5)。2.3.2 第2法（改進(jìn)后的方法）理論板數(shù)：本文依法對(duì)樣品和對(duì)照品進(jìn)行了處理，并按上述條件進(jìn)行色譜測(cè)定，其理論板數(shù)為 5 241，符合藥典規(guī)定。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取新配制的綠原酸對(duì)照品溶液，進(jìn)樣5次，所得峰面積積分值為5 908，5 891，5 893，5 889，5 885，RSD=0.15%(n=5)。
2.4 樣品測(cè)定結(jié)果
2.4.1 第1法將樣品依法處理。結(jié)果見表1。
表1 3批菊花樣品的測(cè)定結(jié)果(略)
2.4.2 第2法（改進(jìn)后的方法）將樣品依法處理。結(jié)果見表2。
表2 3批菊花樣品的測(cè)定結(jié)果(略)
2.5 回收率實(shí)驗(yàn)(第2法) 精密稱取眾生藥業(yè)提供的菊花樣品約0.5 g，定量加入適量的綠原酸對(duì)照品，下同供試品項(xiàng)下操作，在上述色譜條件下測(cè)定，測(cè)得平均回收率為99.9%。結(jié)果見表3。
表3 綠原酸回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)
3 討論
3.1 菊花按《中國(guó)藥典》的方法測(cè)定綠原酸的含量，樣品溶液的提取比較復(fù)雜，含量損失大，特別是從蒸發(fā)皿中用水洗滌定容至5 ml量瓶中，誤差大， 測(cè)出的含量要比實(shí)際的含量低。
3.2 菊花按《中國(guó)藥典》的方法測(cè)定綠原酸的含量，其色譜條件不是很理想，流動(dòng)相的比例要改為80∶20，效果會(huì)更好，特別對(duì)質(zhì)量很差的菊花更要注意。本實(shí)驗(yàn)的樣品由于湖北某企業(yè)貯存時(shí)間太長(zhǎng)，嚴(yán)重褪色，含量很低。若不改動(dòng)流動(dòng)相的比例，則色譜圖的分離效果很差。
3.3 改進(jìn)后的方法中樣品溶液的制備方法簡(jiǎn)便、損失量少、使得測(cè)定的結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，測(cè)出的含量要比第1法高，為標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供可行的依據(jù)。
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液相測(cè)定菊花中綠原酸含量方法的改進(jìn) NEWS
