蘆薈大黃素、蘆薈素（蘆薈提取物）-清除氧自由基作用的研究 | 蘆薈大黃素、蘆薈素（蘆薈提取物）-清除氧自由基作用的研究 |
| 發(fā)布時間:2014-05-26 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):1697 |
蘆薈大黃素、蘆薈素清除氧自由基作用的研究 摘 要:目的：研究蘆薈大黃素和蘆薈素對超氧陰離子自由基（O2^-·）、羥自由基（·OH）的清除作用。方法：采用鄰苯三酚自氧化體系產(chǎn)生（O2^-·），研究蘆薈大黃素、蘆薈素對O2^-·的清除作用；利用Fenton反應產(chǎn)生·OH，研究蘆薈大黃素、蘆薈素對·OH的清除作用；計算表觀清除率及IC50,并與特異性清除劑維生素C做比較。結果：蘆薈大黃素、蘆薈素、維生素C對O2^-·的IC50分別為6．8，8、5，11mg·L^-1，對·OH的IC50分別為0．24，0．25，9．1mg·L^-1，其清除能力蘆薈大黃素〉蘆薈素〉維生素C。結論：蘆薈大黃素、蘆薈素對O2^-·、·OH均有較強清除能力，且清除能力與濃度呈明顯的量效關系。 關鍵詞:蘆薈大黃素 蘆薈素 清除 氧自由基 量效關系 上禾生物 Study of aloe-emodin and emodin scavenging oxy-free radicals Abstract:OBJECTIVE To study the effects of aloe-emodin and emodin on scavenging superoxide anion free radical（ O2^-· ）and hydroxy free radical（·OH）. METHODS O2^-·was produced by 1,2,3 -benzentriol autooxidation systems and ·OH was produced by fenton reaction. The scavenging effects of aloe-emodin and emodin on O2^- ·and · OH were determined and compared with that of vitamin C,and were accumulated scavenging rate and IC50. RESULTS IC50 of scavenging effects of aloe-emodin and emodin and vitamin C on O2^- .were 6.8,8.5 and 11 mg·L^-1 , IC50 of scavenging effects of aloe-emodin and emodin and vitamin C on .OH were 0.24, 0.25 and 9.1 mg·L^ - 1 ;the potency of scavenging free radicals was aloe-emodin 〉 emodin 〉 vitamin C. CONCLUSION Aloe-emodin and emodin have strong clearing function on O2^- ·and · OH, and the clearance is obviously related to the concentration. Key words:aloe-emodin; emodin; scavenging;superoxide anion free radical（ O2^-· ） ; hydroxy free radical（·OH） 超氧陰離子自由基[Oi·]、羥自由基[·OH]等 稱為氧自由基，許多病理生理現(xiàn)象如衰老、腫瘤、炎癥及腦缺血等都與氧自由基有密切關系 ’ 。因 此，在中草藥中尋找高效無不良反應的天然自由基 清除劑的研究，成為醫(yī)藥學活躍的研究領域。蘆薈大黃素和蘆薈素是蘆薈主要藥用成分，存在于蘆薈 的葉皮內(nèi) ，臨床研究表明其具有抗菌、消炎、殺 蟲、抗癌、瀉下、抗衰老等功效 。蘆薈大黃素和蘆 薈素是含有酚羥基的蒽醌類化合物，而酚羥基是許 多天然抗氧化劑的功能基團。研究蘆薈大黃素和蘆薈素對超氧陰離子自由基(SAFR)和羥自由基 (HFR)的清除作用，旨在為蘆薈的藥用價值和開發(fā)提供依據(jù)。 1 材料 752PC型紫外分光光度計(上海光譜儀器公 司)；蘆薈大黃素(中國藥品制品生物檢定所)；蘆 薈素(中國藥品制品生物檢定所)；抗壞血酸，番紅花紅(safranine．T)(天津市光華化學廠)；試劑均為 分析純。 2 方法 2．1 藥品的配制 分別稱取蘆薈大黃素和蘆薈素 12．5 mg，用無水乙醇溶解，并稀釋定容于25 mL量 瓶，搖勻得0．50 g·L 標準溶液。稀釋成0．050 g· L 和0．005 0 g·L 操作液。 2．2 超氧陰離子(Oj·)清除率的測定 在0．05 mol·L～pH 8．2的Tris．鹽酸緩沖液3．0 mL中，加入 不同體積的0．050 g·L 藥物后，均加入2．5 mmo|· L 鄰苯三酚0．5 mL，各管相應補水至總體積為5 mL，混勻后在25℃水浴保溫10 min，立即加入8 mol·L 鹽酸2滴終止反應。注射用水調(diào)零，在 299 nm處測定吸收度A，結果見表1。分組：空未損組=不含藥物及[O ·]；空損組=不含藥物但含 [Oi·]；藥損組=含藥物及[Oi·]；藥未損組=含 藥物但不含[Oj·]。未損管不加鄰苯三酚，清除率d按下式計算 ：d=[1一(A藥損一A藥未損)]／(A空損 一A空未損) 表1 不同濃度蘆薈大黃素及蘆薈素對0；·清除作用 Tab I Scavenging rate for 0；·using aloe-emodin and emodin with different concentration
2．3 羥自由基(·OH)清除率的測定 在0．15 mmol·L～，pH 7．4的磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖 液3．0 mL中、加入不同體積的0．005 0g·L 藥物 后，均加人40 mg·L 番紅花紅1 mL，3％雙氧水1 mL(新鮮配制)，1 mmol·L～EDTA-FeH1 mL，各管 相應補水至總體積為5 mL，混勻后在37℃水浴反 應30 min，立即加人0．1 tool·L EDTA 0．2 mL終 止反應。對照品以純化水代替EDTA—Fe 和供試 品，注射用水調(diào)零，在520 rim處測定吸收度4，結果 見表2。以維生素C(當天配制)做陽性對照組，按 以下公式計算HFE清除率：d=(A樣品一A空白)／ (A對照一A空白) 表2 不同濃度蘆薈大黃素及蘆薈素對·OH清除作用 Tab 2 Scavengingrate ·OH for using aloe-emodin and emodin with diferent concentratiOns
2．4 數(shù)據(jù)處理 各活性物按5個不同濃度檢測， 每個濃度5個樣管，取其均數(shù)計算清除率。對于每 種樣品以清除率為縱坐標，樣品濃度為橫坐標，以半 數(shù)清除濃度(Ic 。)比較其清除0i·和·OH的能力。 3 結果 3．1 蘆薈大黃素和蘆薈素對0；·清除作用 從表1 可見，濃度愈大，抑制百分率也愈大，表明蘆薈大黃素及蘆薈素對0；·清除能力與濃度呈量效關系，但 濃度大到一定時，其量效關系不明顯。根據(jù)半數(shù)濃度IC ，蘆薈大黃素及蘆薈素對SAFR清除作用的 能力均高于SAFR的特異性清除劑維生素c，其中 蘆薈大黃素強于蘆薈素。 3．2 蘆薈大黃素及蘆薈素對·OH清除作用 從表 2結果可見，隨著蘆薈大黃素及蘆薈素濃度增加，清 除率幾乎直線上升趨勢，這兩種藥品對·OH清除作 用特別強，當蘆薈大黃素及蘆薈素濃度分別為0．001 g·L 和0．000 6 g·L 時，其對·OH清除率高達 90。3％和96．4％ ，再加大濃度時，清除率趨于平緩。根據(jù)半數(shù)有效濃度Ic 蘆薈大黃素及蘆薈素對· OH清除作用的能力均高于維生素c，約是其40倍， 其中蘆薈大黃素略強于蘆薈素。 4 討論 蘆薈作為傳統(tǒng)的中藥，具有良好的抗菌、消炎、抗腫瘤、抗輻射損傷、降壓降糖、抗衰老及預防艾滋 病 等藥理作用。而蘆薈大黃素和蘆薈素是蘆薈 主要藥用成分，臨床研究表明其具有抗菌、消炎、殺 蟲、抗癌、瀉下、抗衰老等功效。蘆薈大黃素和蘆薈素含有多個酚羥基蒽醌類化合物，蒽醌類化合物具 有對0i·的清除作用主要是通過它們含有的酚羥基 基團與超氧陰離子發(fā)生了單電子轉移的氧化還原反應所致。清除·OH，系蘆薈大黃素和蘆薈素的酚羥基 和醇基能夠提供活潑的質(zhì)子。游離質(zhì)子愈多，其易 與羥自由基快速地結合成穩(wěn)定的產(chǎn)物 J，對·OH的 清除能力越強。蘆薈大黃素、蘆薈素對0 ·和·OH 均有很強的清除能力，濃度愈大，抑制百分率也愈 大，表明蘆薈大黃素及蘆薈素對O ·和·OH清除能 力與濃度有明顯的量效關系。根據(jù)半數(shù)有效濃度 Ic 清除自由基能力均高于特異性清除劑維生素 c。特別是這兩種物質(zhì)，對·OH的清除能力特別強， 兩者濃度為0．001 g·L 和0．000 6 g·L 時，其對 ·OH清除率高達90．3％和96．4％ ，其Ic約是維生素 c的1／40，能有效清除·OH�！H清除率是反映藥 物抗氧化作用的重要指標，蘆薈大黃素和蘆薈素優(yōu) 于維生素c，是天然高效的自由基清除劑。蘆薈大黃素和蘆薈素易溶于有機溶劑中而難溶于水，這種 特性使之在體內(nèi)抗氧化的效果更好。 |
