蘆薈大黃素(aloe—emodin蘆薈瀉素)含量測(cè)定方法概況 | 蘆薈大黃素(aloe—emodin蘆薈瀉素)含量測(cè)定方法概況 |
| 發(fā)布時(shí)間:2014-05-26 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2267 |
蘆薈大黃素(aloe—emodin)又稱蘆薈瀉素。橙色針狀結(jié)晶 (由甲苯中)。熔點(diǎn)223℃～224 。易溶于熱乙醇，在苯及乙醚 中呈黃色。在氨水和硫酸【f|呈緋紅色，屬蒽醌類化合物，在酸 性溶液f}1被還原則生成蒽酚及其互變異構(gòu)體的蒽酮llI。它廣 泛存在于百合科蘆薈，豆科決明子，蓼科植物大黃中，具有抗 菌、消炎、殺蟲、抗癌、抗衰老等功效 。而蘆薈、大黃、決明子等都具藥用價(jià)值，所以，本文參考曾云瑾 的文獻(xiàn)對(duì)各種蘆薈 大黃素檢測(cè)方法進(jìn)行了綜述比較，為快速、靈敏檢測(cè)蘆薈大黃素提供參考。 1 蘆薈大黃素含量測(cè)定方法 1,1 高效液相色譜法 曾曉英l 4_分別取各蘆薈制品1g，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲處理15min，取上清液5mI 囂 lOmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成樣品溶液。流動(dòng) 相：甲醇一0．1％高氯酸(6：4)；流速：lmI ／rain測(cè)定波長(zhǎng) 254nm。樣品含量測(cè)定結(jié)果：l0倍蘆薈全葉粉含蘆薈大黃 索為0．004％；1000倍蘆薈汁粉含蘆薈大黃素為0．03％；蘆 薈提取物含蘆薈大黃素為O．32％。不同用途蘆薈制品應(yīng)根據(jù)實(shí)際應(yīng)用制定蘆薈大黃素含量指標(biāo)。采用此方法測(cè)定 蘆薈制品中蘆薈大黃素含量，簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，重現(xiàn) 性好，可作為控制蘆薈制品質(zhì)量測(cè)定方法。方子季等 先 取復(fù)方蘆薈膠囊內(nèi)容物約50mg，精密稱定，加甲醇20mL， 超聲提取30min，定容25mL，過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液10mL 加60％三氯化鐵lmL，鹽酸6mI ，水浴回流4h放冷，加酚 酞指示液l滴，滴加濃氨溶液至溶液變淺紅色。此時(shí)產(chǎn)生紅色氫氧化鐵沉淀，以甲醇定容50mL，搖勻。量取約 lOmL，離心沉淀3rain。精密量取上清液5mL水浴蒸干，放 冷，以甲醇溶解并定容5mL，過(guò)濾得膠囊水解液。另精密 吸取蘆薈鮮汁20mI ，按上述方法加試劑回流并定容5mL， 過(guò)濾得鮮汁水解液。取水解液在287nm波長(zhǎng)處，以甲醇： 水(70：30)為流動(dòng)相，以外標(biāo)法測(cè)定。蘆薈大黃素線性范圍為O．04—0．4 g，在此范圍內(nèi)濃度與峰面積線性關(guān)系良好(r=0．9999)。蘆薈大黃素平均回收率為102．5％，RSD為 3．6％。郭華等【6J用反相高效液相色譜法測(cè)定蘆薈汁中蘆薈大黃素的含量，選用YwG—c，色譜柱(200minx4．5ram， 51xm)，以甲醇一水(55：45)為流動(dòng)相，流速hnL／rain，檢 測(cè)波長(zhǎng)為225nm，柱溫為3O℃ 。線性范圍：0．0066tzg～ 0．066~g，r=0．9997；回收率為100．05％，RSD1．28％。馬晶軍 等[7]通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)探討了對(duì)蘆薈中蘆薈大黃素的提取方法，對(duì)HP[ C法同時(shí)測(cè)定蘆薈體內(nèi)蘆薈大黃素和蘆薈苷含 量的方法進(jìn)行了探討，并最終確立了應(yīng)用HPLC測(cè)定蘆薈 體內(nèi)蘆薈大黃素和蘆薈苷含量的色譜條件。流動(dòng)相：甲 醇一水(70：30)；流速1．OmL／min；測(cè)定波長(zhǎng)293nm。結(jié)果 表明，甲醇的提取效果比50％甲醇要好，超聲波提取3O min 即可提取完全。 1．2 薄層掃描法 鄧郁瓊等嗍準(zhǔn)確量取樣品20mL，置于分液漏斗中，用四 氯化碳分3次提取，每次2OraL，合并四氯化碳液，于旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)器中蒸干，用甲醇溶液并定容至lmL，供點(diǎn)樣用。將樣品溶液點(diǎn)于硅膠層析板上，以乙酸乙酯一甲醇一水(100：5：1)作為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，用10％氫氧化鉀甲醇溶液顯色。 掃描條件：測(cè)定波長(zhǎng)為490nm，參照波長(zhǎng)為690nm，線性化器 為SX=3，狹縫為0．4mmx5．0mm，用反射掃描。結(jié)果測(cè)得蘆薈大黃素為1．70Ixg／mL，RSD值為1．34％，回收率為98．44％， RSD0．64％。上述試驗(yàn)表明，薄層掃描法是一種靈敏度較高，操作簡(jiǎn)便快速的方法。 1．3 分光光度法 1．3．1 熒光光度法齊疊福 利用熒光光度法研究確定了測(cè) 定蘆薈大黃素的適用條件。在10mL比色管中依次人 2mL0．5too1．L 的NaC1溶液，2mLTris—HCI緩沖溶液，ImL乙 醇，一定體積的O．Img／mL的蘆薈大黃素乙醇溶液，在kex／ em=470／540nm，pH=7．0的實(shí)驗(yàn)條件下掃描蘆薈大黃素的熒 光光譜，測(cè)定的線性范圍為1．0～8．1p．g／mL，檢測(cè)限為0．0311~g／ mL，方法精密度為2．18％，并成功地測(cè)定了樣品決明子，血清 和尿樣中蘆薈大黃素的含量。 黃麗英等㈣用熒光光度法測(cè)定蘆薈康膠囊中的蘆薈大黃素的含量。在pH為5．76的HAc—NaAc緩沖液中和十二 烷基磺酸鈉(SDS)表面活性劑存在下測(cè)定蘆薈大黃素的 hex和hem。結(jié)果表明，蘆薈大黃索濃度在1．0x10-6_2．5x 10～mol／L，與其熒光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，檢測(cè)限為2×10 mol／ L。蘆薈大黃素的kex和hem分別為460nm和550nm，有較強(qiáng)熒光；而在hex和hem分別為387nm和533nm的體系 時(shí)無(wú)熒光。熒光法用于物質(zhì)的定量分析，其優(yōu)點(diǎn)是靈敏度比紫外可見(jiàn)分光光度法高，與文獻(xiàn)1“】分光光度法比，檢出 下限低二個(gè)數(shù)量級(jí)；同時(shí)其選擇性好，干擾少，但熒光法 的應(yīng)用不如紫外可見(jiàn)分光光度法廣泛，因許多物質(zhì)本身不會(huì)發(fā)熒光。 1．3．2 紫外可見(jiàn)分光光度法黃麗英等【l1J根據(jù)雙波長(zhǎng)原理，分別在測(cè)定波長(zhǎng)255nm和376nm，參比波長(zhǎng)355nm 和 475nm處測(cè)定蘆薈大黃素和蘆薈甙含量。蘆薈大黃素在 2．OOxlO~-5．OOxlO mol／L濃度范圍內(nèi)與光密度(D)呈線性關(guān) 系，r=O．9995；蘆薈甙在2．OOxlO~~6．OOxlO mol／L濃度范圍內(nèi) 與D呈線性關(guān)系，r=-0．9998。應(yīng)用單波長(zhǎng)Uv法不能直接分別 測(cè)定蘆薈大黃素和蘆薈甙，測(cè)定時(shí)互相干擾，因?yàn)閮山M分的吸收光譜互相重疊[121。應(yīng)用等吸收雙波長(zhǎng)法，測(cè)定時(shí)可消除互 相干擾問(wèn)題。測(cè)定蘆薈大黃素，選用D 和D ，255nm是 蘆薈大黃素一特征吸收峰，而蘆薈甙的D 與D， 相等， AD=D 一 =KC1，求兩波長(zhǎng)處D之差△D，消去了蘆薈甙吸收，因此△D=KC1與蘆薈大黃素濃度呈正比。同樣測(cè)定蘆 薈甙時(shí)，選擇測(cè)定波長(zhǎng)為355nm，參比波長(zhǎng)為475nm，消除 蘆薈大黃索的干擾。蘆薈切割創(chuàng)面處汁液其蘆薈大黃素、蘆薈甙的含量>蘆薈皮、蘆薈全葉>蘆薈膠。等吸收雙波長(zhǎng)分光光度法操作快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，無(wú)需分離可同時(shí)測(cè)定 蘆薈樣品中兩組分含量。林新華等f(wàn)l3】根據(jù)兩種物質(zhì)的吸收 光譜，選擇蘆薈大黃素甙為標(biāo)準(zhǔn)加入組分，在蘆薈大黃素的等吸收波長(zhǎng)361．4nm和480．9nm處進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)加入測(cè)定。蘆薈大 黃素甙和蘆薈大黃素濃度在0 1xlO mol／L范圍內(nèi)均符合比爾定律。對(duì)庫(kù)拉索蘆薈中蘆薈大黃素甙和蘆薈大黃素含 量測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)小于2％。此文根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)加 入法特點(diǎn)和雙波長(zhǎng)等吸收法原理而提出的雙波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)加 入法將兩者有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，改善了選擇性又不降低靈敏度。 李光文等[1 依據(jù)蘆薈苷與蘆薈大黃素的光譜特征，選擇 350～450nm為測(cè)定波長(zhǎng)范圍，用多波長(zhǎng)直線回歸分光光度 法同時(shí)測(cè)定蘆薈中蘆薈苷和蘆薈大黃素含量。在測(cè)定波長(zhǎng) 范圍內(nèi)間隔lnm測(cè)定樣品溶液的吸光度值，建立回歸方程 A／ 蘆薈大黃索=C蘆薈苷·蘆薈苷， 蘆薈大黃索+C蘆薈大黃索，蘆薈苷和蘆薈大黃素的測(cè)定回收率分別為97．4％～102．5％、97．5％一100．7％， RSD分別為0．22％～0．89％、0．35％～0．82％，測(cè)定時(shí)二者無(wú)相 互干擾。本方法簡(jiǎn)便可靠，重現(xiàn)性好，為蘆薈資源的進(jìn)一步 開(kāi)發(fā)利用及質(zhì)量控制等提供新的方法和重要依據(jù)。 庚梅等舊利用蘆薈甙和蘆薈大黃素吸光度的良好加和 性，提出了一種同時(shí)測(cè)定蘆薈甙和蘆薈大黃素的方法。在只加入氨水的情況下，分別作蘆薈甙和蘆薈大黃素的工作曲 線；在加入氨水和高碘酸鈉溶液的情況下，作蘆薈甙和蘆薈 大黃素的另外兩條工作曲線。樣品在同樣的兩條件下，分 別測(cè)出吸光度，由四條工作曲線聯(lián)立方程組求解，即可同時(shí)求出蘆薈甙和蘆薈大黃素的量。蘆薈甙的測(cè)定下限為 0．0024mg／mL；蘆薈大黃素的測(cè)定下限為O．O006mg／mL。樣 品分析結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7％ ，加樣回收率99％一 101％。 1．4 電化學(xué)分析法 蘆薈大黃素分子中的蒽醌結(jié)構(gòu)具有電化學(xué)活性，利用電 化學(xué)檢測(cè)高靈敏度的檢測(cè)特性可實(shí)現(xiàn)對(duì)微量蘆薈大黃素的測(cè) 定。伏安法和極譜分析法都是通過(guò)由電解過(guò)程中所得電流一 電位(電壓)或電位一時(shí)間曲線進(jìn)行分析的方法。它們的區(qū)別 在于伏安法使用的極化電極是固體電極或表面不能更新的液 體電極，而極譜分析法使用的是表面能夠周期更新的滴汞電極。 1．4．1 極譜法鄒洪等口日用單掃示波極譜法研究了蘆薈大黃素的電化學(xué)行為。在5％Na CO +5％NaOH(9+1)底液中，蘆 薈大黃素于一0．84V(P．)和一0．97V(P )處產(chǎn)生兩個(gè)示波極譜 峰，利用P�？蓽y(cè)定蘆薈大黃素，線性范圍為0．11～2．4mg／L和 3．0～28．6mg／L，檢測(cè)限為0．06mg／L。本文研究了蘆薈大黃素在 水溶液中的電化學(xué)行為，提出了電極反應(yīng)機(jī)理，建立了蘆薈大黃素的單掃示波極譜分析方法，測(cè)定了中藥大黃中的蘆薈大黃素的含量，結(jié)果良好。還考察了蘆薈大黃素對(duì)超氧自由 基的清除作用。 1．4．2 差示脈沖安家法蘆薈大黃素在良好質(zhì)子源體系中 存在一個(gè)準(zhǔn)可逆的雙質(zhì)子雙電子轉(zhuǎn)移過(guò)程，利用該特性可建立蘆薈大黃素含量測(cè)定的電化學(xué)分析方法。陳偉等【l研究了蘆薈大黃素在玻碳電極上的電化學(xué)性質(zhì)，建立了其含量測(cè) 定的差示脈沖伏安法，并對(duì)測(cè)定條件進(jìn)行了優(yōu)化。在 pH4．0的磷酸鹽緩沖溶液，開(kāi)路攪拌富集2min，于0．4一0．8V電位范圍用差示脈沖伏安法測(cè)定蘆薈大黃素的還原 峰電流。在5×10一一2x10。mol／L范圍內(nèi)，蘆薈大黃素的差 示脈沖伏安峰電流與其濃度有良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限 為3x10一Smol／L。差示脈沖伏安法利用加脈沖電壓的方法，消除電容電流及法拉第電流的畸變，并有效地消除了支 持電解質(zhì)中雜質(zhì)的影響，具有高靈敏度特征。該方法重現(xiàn) 性好，可直接測(cè)定蘆薈中的蘆薈大黃素含量，并可實(shí)現(xiàn)對(duì) 微量蘆薈大黃素的測(cè)定。 1．4．3 碳糊電極上的吸附催化伏安法黎拒難等 提出了一 種以溶解氧為氧化劑，在碳糊電極(CPE)上吸附催化伏安法 測(cè)定含蒽醌基藥物的新方法。用線性掃描伏安法、循環(huán)伏 安法和恒電位電解等手段研究了該催化伏安峰產(chǎn)生的機(jī)理。實(shí)驗(yàn)表明，蘆薈大黃素能夠有效地吸附富集在 CPE表面上。在陰極化電位掃描過(guò)程中，蘆薈大黃素被 還原成蒽氫醌化合物，然后又立刻被溶液中的溶解氧氧 化為蘆薈大黃素，接著又在電極上被還原，從而形成一個(gè)催化循環(huán)。而在汞電極上蘆薈大黃素產(chǎn)生一個(gè)可逆的氧 化還原反應(yīng)，觀察不到其催化反應(yīng)。在0．56mol／L NH 一 NH C1(pH8．9)緩沖溶液中，蘆薈大黃素在CPE上于一0．60V (vs．SCE)產(chǎn)生一靈敏的催化伏安峰，所述方法應(yīng)用于中藥大黃中的蘆薈大黃素的測(cè)定，與高效液相色譜法的測(cè)定結(jié)果基本一致。有機(jī)化合物在CPE和其他固體電極上的吸附催化伏 安法靈敏度高，且電極無(wú)毒，顯示出與汞電極不同的反應(yīng)機(jī) 理。它對(duì)于藥物藥理、藥效、藥物毒性、臨床醫(yī)學(xué)和生物化學(xué)有重要的意義。 1．4．4 1．5階微分陽(yáng)極溶出伏安法林新華[19研究了蘆薈大黃素在以0．1mol／L HAc(pH2．89)支持電解質(zhì)，玻碳電極為工作電極的吸附伏安行為。結(jié)果表明蘆薈大黃素存 在一個(gè)準(zhǔn)可逆的雙電子轉(zhuǎn)移過(guò)程，其峰電流ID和峰電位 Ep與溶液pH值有關(guān)。同時(shí)還建立了用1．5階微分陽(yáng)極溶 出伏安法測(cè)定含量的新方法。在一0．80V(VS．SCE)電位下富 集，可得一靈敏的微分陽(yáng)極溶出峰，峰電位Ep為一0．38V， 峰電流Ip與蘆薈大黃素的濃度在2．0×1O～ 8．0x10—6mol／L 范圍內(nèi)成線性關(guān)系，最低檢出限為1．0x10～mol／L。該法操 作簡(jiǎn)便，靈敏度高，干擾少，可用于不同品種蘆薈中蘆薈 大黃素的直接測(cè)定。 2 小結(jié) 目前，蘆薈大黃素測(cè)定的方法雖多，但是結(jié)果卻相差很 大，如曾曉英 采用高效液相測(cè)得l0倍蘆薈全葉粉含蘆薈大 黃素為0．004％；1000倍蘆薈汁粉含蘆薈大黃素為O．03％；蘆薈提取物含蘆薈大黃素為O．32％。馬晶軍等171用高效液相測(cè) 得庫(kù)拉索蘆薈中蘆薈大黃素的含量為365．5mg／kg。郭華等嘲 用反相高效液相色譜法測(cè)定蘆薈汁中蘆薈大黃素的含量，不 同批號(hào)測(cè)得的結(jié)果分別為0．1331 p,g／mL，0．1112 I~g／m[ ， O．0865txg／mL，0．0717Ixg／mL，O．0614p,g／mL。熒光法比紫外分光光度法的靈敏度高，選擇性好，干擾少，但因許多物質(zhì)本身 不會(huì)發(fā)熒光，所以，熒光法的應(yīng)用不如紫外可見(jiàn)分光光度法廣泛。鄒洪等【 叼院電化學(xué)法來(lái)測(cè)定蘆薈大黃素的含量，此法具有很高的靈敏度，可實(shí)現(xiàn)對(duì)微量蘆薈大黃素的測(cè)定，但因其專 業(yè)性強(qiáng)不易被接受，故用的較少�？梢�(jiàn)，對(duì)蘆薈大黃素含量測(cè) 定方法進(jìn)行系統(tǒng)研究，找出消除系統(tǒng)誤差的方法，正確評(píng)價(jià)不 同分析方法所得結(jié)果之問(wèn)的可比性，確定各種分析方法的定量分析適用性指標(biāo)，對(duì)于指導(dǎo)分析人員對(duì)結(jié)果的精確度及準(zhǔn) 確度的要求、所具備的儀器及試劑等選擇適當(dāng)?shù)姆治龇椒ㄊ?十分必要的。 蘆薈大黃素已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、保健品和化妝 品。因此，加大對(duì)蘆薈大黃素分析方法的研究，對(duì)含有蘆薈大黃素的蘆薈、大黃、決明子等的開(kāi)發(fā)利用有著重要的意 義。
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