綠原酸又名咖啡鞣酸，屬酚類化合物，是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)葬草酸途徑形成 的一種苯丙素類物質(zhì)“1 綠原酸(Chlorogenic acid)是我國傳統(tǒng)名貴中藥杜仲的主要活性成 分其半水合物為針狀結(jié)晶，具有利膽、抗菌、 抗病毒，降壓、增高白細胞及興奮中樞神經(jīng)系 統(tǒng)等多種藥理作用，是保健品、食品、藥品、化 妝品等重要原料[2 。近年的研究表明，杜仲葉 中綠原酸含量豐富，可達1％～5．5％。杜仲葉中 綠原酸的分離方法，目前常用的有萃取法、沉 淀法和聚酰胺柱層析法等，這些方法多存在 成本高、收率低、操作煩瑣、材料不易再生等 缺點。近年來，離子交換樹脂吸附法用于中草 藥中活性性成分的提取與純化取得取得很好 的效果，日益受到人們的重視 】。本試驗以杜 仲葉為原料，采用水提法對杜仲葉綠原酸進行粗提，然后采用不同離子交換樹脂對杜仲 葉綠原酸的吸附性能進行比較，旨在篩選出 一種吸附性能和收率高的樹脂用于替代傳統(tǒng) 綠原酸提取方法。
1 材料
杜仲葉：采于重慶市榮昌縣直升鎮(zhèn)道 觀村5組；綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品 檢定所，批號：l 10753—20041 3)；Amberlite FPA98CL樹脂、Amberlite FPA958CL樹脂均由北京大學(xué)生命科學(xué)院宋加賓教授提 供{強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂(杭州 爭光樹脂廠，批號：ZGA307)；Tu一1901型雙 波束紫外可見分光光度計(北京普析通用 儀器有限責(zé)任公司)、2004型恒溫水浴鍋(常 州國華電器有限公司)、ESJ120-4型電子分 析天平(沈陽龍騰電子有限公司)。
2 方法
2。1杜仲葉綠原酸粗提液的制備 粉碎新鮮杜仲葉后，按l：l2的料液比 加入蒸餾水，在50℃恒溫水浴浸提3次，每 次2h，合并3次浸提液，將浸提液減壓濃縮 1／2，再將濃縮液中加入1％殼聚糖絮凝，過 濾，濾液用活性碳脫色，得到杜仲葉綠原酸粗提液。
2．2樹脂預(yù)處理及再生
將Amberlite FPA98CL樹脂、Amberlite FPA958CL樹脂、強堿性苯乙烯交換樹脂分 別用蒸餾水水溶脹，然后用lmol／L的NaOH 溶．恣攪拌浸泡4h，蒸餾水洗至中性，然后用 0．~ Iol／L的HCl攪拌縵泡4h，用蒸餾水洗 至中 性待用。
2． 樹脂靜態(tài)吸附實驗
準(zhǔn)確稱取預(yù)處理的Amberlite FPA98CL、 Ambeflite FPA958CL、苯乙烯離子交換樹脂各5 ，按1：1000~入粗提液于2000ml_~角瓶， 在25℃的恒溫水浴振蕩器上振搖吸附8h，用 100目尼龍布過濾樹脂，一倍樹脂量的40％乙 醇50℃下攪拌洗脫8h，洗脫液中經(jīng)甲醇重結(jié) 晶得綠原酸純品。計算出杜仲葉中綠原酸收率(mg／Kg)。
三種樹脂的對綠原酸的吸咐率依下式 計算[8】． E％：— Co — Yo - ～ Cy, ×100％ ‘ Co為吸附前溶液的濃度(mg／m1)；C 為 吸附后溶液的濃度(mg／m1)；V 為吸附前溶 液的體積(m1，lV．吸附后溶液的體積(m1)；W 為樹脂重量(g)。
2．4數(shù)據(jù)處理
應(yīng)用SPSS1 l軟件對三種樹脂杜仲葉綠 原酸提取率和{}寸脂吸附率進行顯著性t檢 驗，比較組間差異性。
3 結(jié)果
3．1三種樹脂對杜仲葉提取液綠原酸吸附容量 結(jié)果見：表l所示，三種樹脂對杜仲葉中 綠原酸吸附容量(綠原酸mg／g樹脂)Amberl FPA98CL型樹脂、Amberlite FPA958cL型樹 脂吸的附容量接近差異不顯著，而苯乙烯離 子交換樹脂吸附低容量，不能用于杜仲葉中 綠原酸的提取。
3．2 三種樹脂對杜仲葉提取液綠原酸提取盔 采用三種樹脂吸附后，杜仲葉綠原酸的提取率(綠原酸mg／lOOg杜仲葉)相差較大，結(jié) 果如表2所示，采用AmberHte FPA98CL型樹 脂的綠原酸收率最高，與其余兩種樹脂比較 差異顯著。
3．3 Amberl ite FPA98CL樹脂吸附的最適條件 為適應(yīng)工業(yè)化的生產(chǎn)，我們采用靜態(tài) 吸附方法，而樹脂的用量是最大影響因素之一。本試驗采用不同類型的樹 脂下進行吸附實驗，結(jié)果表明．在pH值為 4，樹脂用量2．34g／100m1吸附效果最好。
4 分析與討論
大孔吸附樹脂具有吸附量大 選擇性 好、易解吸、易再生、成本低、效率高，特別 適用水溶性化合物的提取分離等優(yōu)點，國 內(nèi)外學(xué)者已廣泛將其用于生物堿、皂甙、黃 酮、多糖等的提取，取得了顯著的效果【9】。本 試驗利用大孔吸附樹脂分離杜仲葉綠原 酸，其工藝較簡單、成本低。產(chǎn)率高．
從試驗的結(jié)果看出，Amberlite FPA08CL 和Amberlite FPA958CL樹脂都對綠原酸具有較強的吸附作用，而苯乙烯系陰離子交換樹 脂則吸附效果較差，但從收率來講Amberlite FPA98CL樹脂收率又遠高于Amberlite FPA958CL樹脂，這和Amberlite FPA98CL樹 脂特性有關(guān)，它除有離子交換作用外還具有 分子篩功能，既能有效的和綠原酸進行吸附， 又能快速的洗脫而脫吸附。
Amberlite FPA98CL樹脂對綠原酸最適吸附pH值為4。綠原酸作為多羥基酚酸， 在酸性條件下易被吸附。因為在酸性條件 下，綠原酸以分子形式存在，樹脂對其吸附作用增強；在強酸條件下，以內(nèi)酯形式存在的 綠原酸容易水解；在堿性條件下，以離子形式 存在的綠原酸則不易被吸附。 樹脂吸附法用于杜仲葉中綠原酸提取是一種操作簡便、節(jié)約有機溶劑，較高收率 的提取方法，羅門哈斯公司Amberlite FPA98CL在DH4條件下，樹脂用量2．34g／ 100ml，能夠達到鮮葉最大3．04％的收率
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離子交換樹脂純化杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid條件的篩選 
