HPLC檢測獨一味分散片中木犀草素的含量 | HPLC檢測獨一味分散片中木犀草素的含量 |
| 發(fā)布時間:2014-08-05 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2202 |
HPLC法測定獨一味分散片中木犀草素的含量 關(guān)鍵詞：獨一味分散片 木犀草素 獨一味 1 儀器與試藥 島津高效液相色譜儀，SPD·lOAvp紫外檢測器，Lc- 10ATvp輸液泵，浙江大學(xué)N一2000雙通道色譜工作站，AS3120 超聲波清洗機，METrLER AG135電子天平。木犀草素對照 品：購自中國藥品生物制品檢定所，批號111520-200201；獨一 味分散片：廣西萬山紅有限公司提供批號040601、040602、 040603；甲醇為色譜純，磷酸、鹽酸為分析純，水為雙蒸水。 2 方法與結(jié)果 2．1 色譜條件色譜柱：VP-ODS(4．6 mE×150 mm，5 um)； 流動相：甲醇-0．4％ 磷酸溶液(50：50)；流速：1．0 ml·min一； 柱溫：30℃ ；檢測波長為350 nm。 2．2 試液的制備 2．2．1 供試品溶液的制備取本品20片，研細，取0．9 g，精 密稱定，置25 ml量瓶中，加2．5 mol·L 鹽酸甲醇溶液20 rnl，超聲處理30 min，放冷，用2．5 mol·L 鹽酸甲醇溶液稀 釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，置50 ml圓底 燒瓶中，于90℃水浴中加熱水解30 min，放冷，轉(zhuǎn)移至25 m1 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。 2．2．2 陰性對照溶液的制備照處方比例稱取輔料，預(yù)膠化 淀粉2．05 g、交聯(lián)聚維酮0．70 g、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉0．70 g、阿司帕坦0．05 g，硬脂酸鎂適量，按供試品溶液的制備方法 制備陰性對照溶液。 2．2．3 對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過 夜的木犀草素對照品9．10 mg，置200 ml量瓶中，加甲醇溶解 并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液(45．50 mg·L )。 精密吸取對照品貯備液5 m1，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至 刻度，搖勻，即得(22．75 mg·L )。 2．3 系統(tǒng)適用性試驗分別取供試品溶液、對照品溶液、陰 性對照溶液，按上述色譜條件實驗，對供試品峰和對照品峰的 系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)進行考察，槲皮素的理論塔板數(shù)為5317，分 離度為R。=2．4、R：=3．3，陰性無干擾(見圖1)。 2．4 線性考察精密吸取對照品貯備液1．0、3．0、5．0、7．0、9．0 m1分別置l0 ml量瓶中，各加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即 得。分別精密吸取上述溶液各10 l，注入液相色譜儀，按上 述條件測定，峰面積分別為：163961、496966、819395、 1162344、1468462。以木犀草素對照品進樣濃度C(mg·L ) 為橫坐標，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標，進行線性回歸，得回歸 方程為：A=35982C+3630．6，r：0．9999(n=5)。結(jié)果表明：槲皮素進樣濃度在4．55～40．95 mg·L 范圍內(nèi)，與峰面積 積分值呈良好的線性關(guān)系。 2．5 進樣精密度試驗精密吸取對照品溶液l0 l，連續(xù)進 樣5次，記錄色譜圖與峰面積，峰面積分別為：756791、 756893、755329、750309、755433，其RSD=0．4％(n=5)，精密 度較好。 2．6 重現(xiàn)性試驗取獨一味分散片(081201)，分別制備5份 供試品溶液，按上述色譜條件測定木犀草素的含量，峰面積分 別為：700959、706426、698356、700188、696796，測得平均每片 含量為0．768 mg，其RSD=1．1％(n=5)，重復(fù)性良好。 2．7 穩(wěn)定性試驗取上述供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、 24 h進樣10 l，記錄色譜圖，量取峰面積，峰面積分別為： 705914、707100、702811、702036、700225、699646，其RSD = 0．5％(n：5)，實驗表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。 2．8 加樣回收試驗取已知含量的同一批號樣品(批號： 081201，含量為0．768 mg·L～ ·片 )6份(每份約0．5 g)， 置25 ml量瓶中，分別精密加入3 ml木犀草素對照品溶液 (206．2 mg·L )，按上述”供試品溶液的制備”方法制備。 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 l，注入液相色 譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積，計算，測得木犀草素的平均回 收率為100．3％ ，RSD=1．3％ ，結(jié)果見表1 2．9 樣品測定將本品三批樣品，照“2．2．2”項下方法制得 供試品溶液。分別取對照品溶液及供試品溶液10 l進樣。 按外標法計算槲皮素含量。結(jié)果得批號081201、081202、 081203樣品的含量分別為每片0．770、0．679、0．750 mg。 3 討論 獨一味分散片系獨一味提取制成的制劑，獨一味含有多 種黃酮類化合物：木犀草素、木犀草素-7—0一葡萄糖苷、槲皮 素、槲皮素一3—0 阿拉伯糖苷、芹菜素-7—0一新陳皮糖苷等。為 了控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，保證臨床用藥的有效性，我們參照“獨一味膠囊”藥品標準及其2005年版藥典采用HPLC法測定木 犀草素(C H 0 )含量。我們比較了甲醇-水，乙腈-水，和不 同濃度的磷酸一甲醇流動相系統(tǒng)的分離效果，乙腈-水體系分 離效果較差，很難將樣品中的木犀草素與其他成分分開，甲 醇一水系統(tǒng)用磷酸溶液調(diào)pH后分離效果明顯改善，經(jīng)試驗發(fā) 現(xiàn)以甲醇-0．4％磷酸溶液(50：50)時，分離效果最好。對甲 醇、水、不同濃度的鹽酸水溶液、不同濃度的鹽酸甲醇溶液，作 為提取溶劑進行考察，2．5 tool·L 鹽酸甲醇溶液好于其他 提取溶劑。對供試品加入2．5 tool·L。鹽酸甲醇溶液溶液， 分別放人80~C，90E，95E，100~C水浴中加熱水解。結(jié)果發(fā) 現(xiàn)90qC時水解得更徹底，溫度再升高木犀草素苷元峰面積趨 于減少，故選擇這個溫度。觀察發(fā)現(xiàn)水浴30 rain時木犀草素 峰面積最大。取木犀草素對照品溶液在190—400 nm的波長 范圍內(nèi)進行光譜掃描。根據(jù)木犀草素的紫外吸收，選擇了 350 tim作為檢測波長。在此條件下木犀草素分離效果好。 實驗表明采用本方法直接測定獨一味分散片中木犀草素的含 量，分離完全，方法簡便、快速、準確度好，精密度高，可作為該 制劑的質(zhì)量控制。 木犀草素 長沙上禾生物 www.csnutilities.com |
