花生殼中總黃酮及木犀草素提取的工藝研究 | 花生殼中總黃酮及木犀草素提取的工藝研究 |
| 發(fā)布時間:2014-09-19 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2113 |
花生殼中總黃酮和木犀草素提取工藝研究
為評價指標，優(yōu)選提取工藝。確立以75％乙醇為溶劑，料液比1：10，每次提取2h，提取3次為優(yōu)選工藝， 花生殼中總黃酮和木犀草素均可有效提取。該工藝簡捷、經(jīng)濟、可行，適合工業(yè)化生產(chǎn)。 Study on Technology of Extracting Totall Flavonoid and Luteolin from Peanut Hulls Abstract:To study the optinum technology of extraction totall flavonoid and luteolin from peanut hulls. To optinum technology of extraction with the content of totall flavonoid and luteolin in the extract as reference by orthogonality experiments. The optimum condition with ethanol extraction was as follows, 75% ethanol solution as solvent,ratio of liquid to solid 10 ： 1, extraction time was two hours,extraction totall flavonoid and luteolin in the extract was obtained. The number of times was third,and the highest content of method is simple,economical and is reliable for the industrial production. Key words:peanut hull ; totall flavonoid; luteolin; orthogonality experiments 花生殼(Peanut hul1)是豆科一年生草本植物花生 (Arachis hypogeae L．)的干燥果殼，我國有豐富的資 源。 花生殼作中草藥，其標準已收載于1996年版《云南省藥 品標準》[1]。在花生殼的有效組分總黃酮中 ，以木犀草素 含量最高。研究[2-6]證明，花生殼提取物中總黃酮不僅具 有降血脂和降血壓的作用，同時 還有抗氧化、鎮(zhèn)咳平喘、 抗菌消炎及增強免疫和抗腫瘤的作用。為更好地開發(fā)和 利用花生殼資源，本文 采用正交試驗法【 {研究花生殼的 有效成分總黃酮及木犀草素的提取工藝。 1實驗部分 1．1 材料與儀器 花生殼(產(chǎn)地：安徽)；蘆丁(中檢所，批號100080— 200306)；木犀草素對照品(中檢所，批號111520— 200201)；甲醇(色譜純)，乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧 化鈉、磷酸(分析純)，重蒸水(自制)。 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)；真空干燥箱 (ZK一82A型，上海實驗儀器廠)；高效液相色譜儀(SPD 一 10Avp，LC一10Atvp，日本島津)；紫外一可見分光光度計 (6010型，安捷侖科技有限公司)；電子天平 (G258型，德 國梅特勒公司)。 1．2 實驗方法 1．2．1藥材預(yù)處理 將花生殼用冷水洗凈，于60℃干燥4h，粉碎成粗 粉，備用。 1．2．2提取物溶液的制備 藥材粗粉一溶媒浸濕一回流提取一趁熱抽濾一濾 液減壓濃縮一乙醇溶解定容。 木犀草素優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商長沙上禾生物 1．2．3提取物中總黃酮的含量測定 ① 樣品配置 對照品溶液配置：精密稱取在80℃減壓干燥至恒重 的蘆丁對照品lOmg，置100mL容量瓶中，加75％乙醇 80mL，置水浴微熱使溶解，放冷，加75％乙醇至刻度，搖 勻，作對照品溶液。 供試品溶液配置：精密量取提取物溶液2mL，置 25mL容量瓶中，加75％乙醇稀釋并定容，搖勻，過濾，取 續(xù)濾液，作供試品溶液。 木犀草素優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商長沙上禾生物 ② 樣品測定 量取供試品溶液2mL，置10mL于容量瓶中，補 75％乙醇3mL，加5％亞硝酸鈉溶液0．3mL，搖勻，放置 6min后分別加10％硝酸鋁溶液0．3mL，搖勻，放置 6min，再分別加4％氫氧化鈉試液4mL， 再加水至刻度 ， 搖勻，放置10min。按照分光光度法在510nm波長處測 定吸收度值，代人標準曲線計算總黃酮含量。 1．2．4提取物中木犀草素含量的測定 ① 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱ODS Luna(2)51xm，4．6mmx250mm)；流動 相：甲醇一0．4％磷酸水溶液(60：40)；流速：lmL／ min；檢測 波長：350nm；進樣量：201．zL。 ② 樣品配置 對照品溶液配置：精密稱取木犀草素對照品適量， 用流動相溶解并稀釋，制成201xg／mL的溶液，作為對 照 品溶液。 供試品溶液配置：精密量取提取物濃縮液lmL，置 10mL容量瓶中，加流動相稀釋并定容，搖勻，過濾，取 續(xù) 濾液，作為供試品溶液 ③ 樣品測定 分別取對照品溶液和供試品溶液20lxL，注入液相 色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算含量。 2結(jié)果與討論 2．1 乙醇提取工藝的研究 2．1．1正交試驗方案(三水平四因素)設(shè)計 以乙醇濃度、料液比、提取時間和提取次數(shù)作因素， 分別考察三個梯度水平。通過正交試驗設(shè)計，以總 黃酮 和木犀草素提取量作為評價指標，權(quán)重指標分別取0．2、 0．8，進行綜合評價�？傇u價值=0．2×總 黃酮+木犀草素× 0．8，優(yōu)選提取工藝。試驗因素與水平見表1。 表1 因素水平表
2．1．2 正交試驗結(jié)果及方差分析 表2 I-9(34i,-1=交試驗表
注： (2，2)=19．00 Fool(2，2)=99．0 正交試驗結(jié)果及方差分析：因素試驗中A>D>C>B， 即乙醇濃度>提取次數(shù)>提取時間>料液比；水平試驗中 A：I<2>K3>K1，B：Ks≥K2≥Kl，C：K3≥K2>Kl，D：K3≥K2> K。。結(jié)合方差顯著性分析：因素B的各水平 對試驗結(jié)果影響無顯著性差異，因素C影響相對較小。從能耗與經(jīng) 濟角度優(yōu)選B 和C ，由此得出優(yōu)選方案 為A2BzCzD，。 即：75％乙醇，10倍量料液比，每次提取2h，提取3次。 2．2 總黃酮含量測定方法學(xué)驗證 2．2．1標準曲線 精密吸取蘆丁對照品溶液lmL、2mL、3mL、4mL、 5mL，分別置于10mL容量瓶中，依次補加75％乙醇4、 3 、2、1、0mL，再加5％亞硝酸鈉溶液0．3mL，搖勻，放置 6min后分別加10％硝酸鋁溶液0．3mL，搖勻，放 置 6min，再分別加4％氫氧化鈉試液4mL，再加水至刻度， 搖勻，放置10min，按照分光光度法在510nm波 長處測 定吸收度值。以吸收度值為縱坐標，濃度為橫坐標，得回 歸方程：A=12．682C一0．0329，r=-0． 9996。結(jié)果表明，蘆丁在 10～50lxg／mL的濃度范圍內(nèi)與吸收度顯良好線性關(guān)系。 2．2．2重復(fù)性試驗 取同一批次提取物供試溶液6份各lmL，按標準曲 線測定方法依法配置并測定，結(jié)果供試溶液含量的RSD 為1．87％，表明本方法精密度良好。 木犀草素優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商長沙上禾生物 2．2．3回收率試驗 取已測定含量的提取物供試溶液，按高、中、低濃度 各平行配置3份，分別加入適量對照品溶液，依法測 定， 結(jié)果供試溶液的高、中、低濃度的平均加樣回收率為 99．23％，ltSD為1．67％，表明本方法的準確 度高。 2．2．4穩(wěn)定性考察 取供試溶液lmL依法顯色放置10min后，在室溫 條件下分別在0h、1h、2h、4h、8h測定吸收度A值，RSD 為 1．98％，表明供試液在室溫條件下8h內(nèi)穩(wěn)定。 木犀草素優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商長沙上禾生物 2．3 木犀草素含量測定方法學(xué)驗證 2．3．1 專屬性試驗 分別取木犀草素對照品溶液和供試品溶液，按照色 譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1。圖1表明，供試品 溶 液中木犀草素與其它成分有效分離，專屬性強。 木犀草素優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商長沙上禾生物 2．3．2線性范圍 精密稱取木犀草素對照品適量，用甲醇超聲溶解并 稀釋制成50lxg／mL的標準溶液，精密量取標準溶液 lmL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL置于10mL容量瓶中，用 流動相稀釋并定容，搖勻，按上述色譜條件進樣測 定，以 木犀草素峰面積A為縱坐標，進樣濃度C(wg／mL)為橫 坐標，得回歸方程為：A=55754C+8559．5， r-0．9998。結(jié) 果木犀草素濃度在5~30lxg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 2．3．3 重復(fù)性試驗 取同一批次提取物濃縮液樣品5份，依法配置并i貝4 定，結(jié)果供試品溶液含量的RSD％為1．22％。
A一木犀草素對照品；B一木犀草素提取物樣品 木犀草素優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商長沙上禾生物 圖1 色譜圖 2．3．4 回收率試驗 取已測定含量的提取物濃縮液，按高、中、低濃度各 平行配置3份，分別加入適量的對照品溶液，依法測 定， 結(jié)果供試品溶液的高、中、低濃度的平均加樣回收率為 98．9％，RSD為2．08％。 2．3．5 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，室溫條件下分別在0h、lh、2h、4h、 8h、12h測定，以峰面積計，RSD為1．15％，結(jié)果表 明供試 品溶液在室溫條件下12h內(nèi)穩(wěn)定。 3 結(jié)語 文獻[11-I4】報道提取花生殼有效成分的方法有溶劑 法、超聲法、微波法及超臨界CO 法等，其中溶劑提 取法 報道較多，多以甲醇、丙酮和乙酸乙酯為提取溶劑。本文通過上述溶劑預(yù)試與乙醇對比，結(jié)果在總黃 酮提取率上 無顯著性差異，因此，本文在綜合工業(yè)生產(chǎn)設(shè)備、成本及 安全性等因素下，選擇乙醇作提取 溶劑。在正交試驗設(shè) 計評價值中因總黃酮含量是木犀草素的4～5倍，故采用 權(quán)重指標0．2和0．8進行平 衡。 木犀草素優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商長沙上禾生物 www.csnutilities.com |
