洋甘菊提取物芹菜素對(duì)大鼠缺血再灌注肝臟的保護(hù)作用 | 洋甘菊提取物芹菜素對(duì)大鼠缺血再灌注肝臟的保護(hù)作用 |
| 發(fā)布時(shí)間:2014-12-20 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2468 |
摘 要:目的觀察洋甘菊提取物芹菜素Apigenin對(duì)大鼠缺血再灌注肝臟損傷的防護(hù)作用。方法 雄性SD大鼠 ，隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血再灌注組（I／R組）和I／R加洋甘菊提取物芹菜素處理組。肝臟缺血再灌注后 ，分別觀察血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）及乳酸脫氫酶（LDH）含量的變化，同時(shí)分析肝 組織中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性及肝組織病理學(xué)的改變。結(jié)果肝臟缺血再灌注 后，與假手術(shù)組比較，血清中AST、ALT、LDH及肝組織中MDA含量均顯著增加，而S0D活性顯著的降低（P 〈0.01），同時(shí)肝臟門靜脈周圍瘀血明顯，可見不同程度的肝細(xì)胞腫脹、脂肪空泡變；經(jīng)洋甘菊提取物芹 菜素處理后，與缺血再灌注組相比較，血清中AST、ALT、LDH及肝組織中MDA均降低，而S0D活性增高（P 〈0.05），同時(shí)肝臟的瘀血明顯較缺血再灌注組輕，微血管未見明顯損傷，竇間隙稍寬，細(xì)胞變性壞死不 明顯。結(jié)論洋甘菊提取物芹菜素對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用。 The Protective Effect of Apigenin on Hepatic Ischemia Reperfusion Injury in Rats Abstract:To investigate the protective effect and its role of apigenin on hepatic ischemia reperfusion injury in rats, Methods Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups： pseudo-operation normal control group, hepatic ischemia reperfusion injury model group, api- genin group, After hepatic ischemia and reperfusion, to analysis the level of ALT, AST and LDH in the serum and observe the change of MDA and SOD activity of the hepatic tissue. The injury circumstance of the liver tissue in each group was compared by HE staining. Results After hepatic ischemia reperfusion, the MDA level and the content of ALT, AST and LDH increased, and the SOD activity decreased obvi-ously comparing with the normal group （P〈0.01） ; Comparing to the hepatic isehemia reperfusion injury model group, the MDA level and the content of ALT, AST and LDH decreased, and the SOD activity increased （P〈 0.05）. The change could be also observed by the optical microscope which liver cell injury of the apigenin groups was evidently slight than that of the hepatic isehemia reperfusion injury model group. Conclusions The apigenin have a prominent protective effect on hepatic isehemia reperfusion injury in rats. Key words:Apigenin Ischemia reperfusion Liver Antioxygen 肝臟缺血再灌注損傷是肝臟手術(shù)過程中常見一 種病理生理變化，可產(chǎn)生氧自由基，損傷肝細(xì)胞超微 結(jié)構(gòu) ，影響肝臟的功能口]。因此，在臨床的肝臟手術(shù) 中，如何減輕肝臟缺血再灌注損傷的程度，是目前研 究 的熱點(diǎn)。洋甘菊提取物芹菜素是一種天然多酚類化合物，近年 來研究發(fā)現(xiàn)，它是一種天然的抗氧化劑，具 有明顯的 抗氧化作用，可消除體內(nèi)過多的自由基，保護(hù)細(xì)胞膜 的結(jié)構(gòu)口]。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠肝臟局部 缺血再灌 注模型，經(jīng)洋甘菊提取物芹菜素處理后，觀察血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)及乳 酸脫氫酶(LDH)含 量的變化，同時(shí)分析肝組織中丙二醛(MDA)含量和 超氧化物歧化酶(S0D)的活性及肝組織 病理學(xué)的改 變，從而探討洋甘菊提取物芹菜素對(duì)大鼠缺血再灌注肝臟損傷的保護(hù)作用。 1 材料與方法 1．1 材料 雄性SD大鼠60只，體重1 80～2 20 g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提 供；MDA、SOD試劑盒 由南京建成生物工程研 究所提供；洋甘菊提取物芹菜素購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。 1．2 動(dòng)物分組與模型建立 建立大鼠肝臟局部缺 血再灌注模型is]，手術(shù)前禁食I2 h，腹腔注射4 戊 巴比妥鈉(40 mg／kg)麻醉，腹 正中切El，暴露肝門 部，用血管夾夾閉門靜脈和肝動(dòng)脈，造成7O 肝臟缺 血。70 min后去除血管夾，恢復(fù) 缺血肝血流，關(guān)腹. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組，給予開腹及 暴露肝蒂處理，不阻斷肝臟血流；缺血再灌注組，肝 門 阻斷，缺血70 min后，再灌注12O min；洋甘菊提取物芹菜素治療組動(dòng)物，手術(shù)前5天，每天El服灌胃2O mg ／kg的芹 菜素，再阻斷肝門，缺血70 min后，再灌注12O min。各組動(dòng)物分別在再灌注后120 min，通過靜 脈取血， 并取肝臟標(biāo)本，待測(cè)。 1．3 指標(biāo)測(cè)定 1．3．1 血清中生化指標(biāo)的檢測(cè) 血液標(biāo)本，加入抑 肽酶，靜置約20 min，2 000 r／min，離心10 min，提取 血清標(biāo)本，一2O℃保存。生 化儀檢測(cè)血清中AST、 ALT、LDH含量的變化。 1．3．2 肝臟組織中MDA、SOD含量的變化 低溫 保存的盱組織，加入1 mol／L的HC1，碾磨制成組織 勻漿．s 000 r／min，離心10 min，取上清液 ，按試劑盒 說明用硫代巴比妥酸比色法測(cè)定MDA、黃嘌呤氧化 酶法測(cè)定SOD的活性變化。 1．3．3 肝組織病理學(xué)觀察 肝臟組織，通過1 0 甲醛溶液固定，按病理學(xué)常規(guī)制片，HE染色，光學(xué)顯 微鏡觀察肝臟組織病理學(xué)的改 變。 1．4 統(tǒng)計(jì)處理 所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x± s)表示，采用SPSS 10．0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P < 0．05。 2 結(jié)果 2．1 血清中生化指標(biāo)的變化 缺血再灌注后，與假 手術(shù)組相比，血清中AST、AI T、LDH 含量均顯著 增加(P< 0．01)；經(jīng)洋甘菊提取 物芹菜素處理后，血清中AST、 ALT、LDH 含量與缺血再灌注組相比均降低(P< 0．05)。見表1。
注：*與正常組相比，P< 0．O1；**與缺血再灌注組相比，P< 0．05。 2．2 肝組織中MDA、SOD活性的變化 缺血再灌 注后，與假手術(shù)組相比，肝組織中MDA含量顯著增 加，而SOD活性顯著降低(P< 0．01)；經(jīng)洋甘 菊提取物芹菜素處 理后，與缺血再灌注組相比較，肝組織中MDA含量 顯著降低，而SOD活性顯著增加(P< 0 ．01)。見表 2。
注：*與正常組相比，P< 0．01；** 與缺血冉耀注組相比，P< 0．05。 2．3 肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變 光鏡下，假手術(shù)組肝細(xì)胞 及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞均正常(圖1見封四)；缺血再灌注 組，肝臟門靜脈周圍瘀血明 顯，可見不同程度的肝細(xì) 胞腫脹、脂肪空泡變，偶可見灶性壞死(圖2見封 四)；洋甘菊提取物芹菜素組再 灌注后，肝臟的瘀血明顯較缺血再 灌注組輕，微血管未見明顯損傷，竇間隙稍寬，細(xì)胞 變性壞死不明顯 ，仍可見單個(gè)細(xì)胞壞死 肝臟缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制目前尚不完全 清楚，研究表明，氧自由基、脂質(zhì)過氧化在肝臟缺血 再灌 注損傷的過程中起著重要的作用。氧自由基是 一種含未配對(duì)電子的化學(xué)基團(tuán)，具有高度的不穩(wěn)定 性，對(duì) 蛋白質(zhì)、脂肪及核酸等生物活性物質(zhì)具有損傷 作用。在肝臟缺血再灌注過程中，發(fā)生超氧化物陰離子自由 基反應(yīng)，可產(chǎn)生大量氧自由基，導(dǎo)致脂質(zhì)過 氧化反應(yīng)，造成肝細(xì)胞腫脹、變性、壞死I4 ]。MDA 能反應(yīng)細(xì) 胞膜脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映出細(xì)胞 損傷的程度。此外，氧自由基清除劑SOD，可以間接 的反映體內(nèi) 氧自由基水平及脂質(zhì)過氧化的損傷程 度 ]。洋甘菊提取物芹菜素是一種天然多酚類化合物，具有抗自 由 基損傷、抑制血小板活化與聚集、擴(kuò)張心血管、降 低心肌耗氧、改善心肌代謝和心臟功能等眾多藥理 作 用，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞也具有一定的保護(hù)作用. 肝臟缺血再灌注后，與假手術(shù)組比較，光鏡下可 見肝臟門靜脈周圍瘀血明顯，可見不同程度的肝細(xì) 胞腫 脹、脂肪空泡變，同時(shí)血清中AST、AI T、LDH 及肝組織中MDA含量均顯著增加，而SOD活性顯 著的降低， 表明肝細(xì)胞在缺血再灌注期間氧自由基 生成增加，肝臟細(xì)胞受到了自由基的攻擊，機(jī)體清除 自由基的能 力下降；經(jīng)洋甘菊提取物芹菜素處理后，與缺血再灌注 組相比較，肝臟的瘀血較缺血再灌注組明顯減輕， 微 血管未見明顯損傷，竇間隙稍寬，細(xì)胞變性壞死不明 顯，而且血清中AST、ALT、LDH 及肝組織中MDA 均降低，而SOD活性增高，表明洋甘菊提取物芹菜素可以抑制肝 臟缺血再灌注后SOD的失活，降低細(xì)胞內(nèi)氧 自由基 含量，使MDA生成下降，從而抑制大鼠肝組織的脂 質(zhì)過氧化反應(yīng)。 本研究結(jié)果表明，洋甘菊提取物芹菜素Apigenin可能通過拮抗脂質(zhì)過 氧化反應(yīng)，清除自由基的生成等途 徑，減輕缺血再灌 注所造成的肝臟損傷，從而保護(hù)肝組織的功能，為臨床 中缺血再灌注損傷性疾病的防 治提供了新的思路。 上禾生物 www.staherb.cn www.csnutilities.com |
