| 番瀉葉為豆科(Leguminosae)植物狹葉番瀉 (Cassia angustifolia Vah1)及尖葉番瀉(Cassia acutifo— lia Delile)的干燥小葉，性寒，味甘、苦。功能瀉熱行 滯，通便，利水。用于熱結積滯，便秘腹痛，水腫脹 滿。主要成分是番瀉苷A及B、番瀉苷C及D、蘆薈大黃素雙蒽酮苷、蘆薈大黃素、大黃酸等�！吨袊� 典)2005年版一部含量測定項下目前僅是采用分光 光度法測定番瀉葉中番瀉苷B的含量，但番瀉葉中 所含的蘆薈大黃素亦有瀉下作用 J，故嘗試通過 HPLC建立番瀉葉中蘆薈大黃素的含量測定方法， 以對番瀉葉藥材內在質量有更加全面的控制，本檢 測方法不僅簡便、快速、準確性、重現(xiàn)性好，而且更 加穩(wěn)定。
1 儀器與試藥
儀器：WATERS 600-2996高效液相色譜儀。 WATERS 2996檢測器，EMPOWER色譜工作站； MILLIPORE公司超純水制備儀；METI’LER TOLEDO 電子天平；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器 (功率200 W，頻率25 KHz)。
樣品：番瀉葉由廣州奇星藥業(yè)有限公司提供； 對照品：蘆薈大黃素購于長沙上禾生物，純度為90．4％ ，供含量測定用； 試劑：甲醇為色譜純，其余為分析純。
2 方法與結果
2．1 色譜條件分析柱為Hypersil ODS2(200 mm ×4．6 mm，5 m)；以甲醇-0．2％磷酸溶液(70：30) 為流動相；流速1．0 ml／min；檢測波長254 nm；柱溫 30~C。理論板數(shù)按蘆薈大黃素峰計算應不低于 4 000。
2．2 對照品溶液的制備取蘆薈大黃素對照品適 量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含30 g的溶液， 即得。
2．3 供試品溶液的制備取番瀉葉20 g，粉碎，過 3號篩，取2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加人甲 醇50 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，用甲醇 補足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25 ml，置錐 形瓶中，水浴蒸干，殘渣加8％ 鹽酸溶液15 ml，水浴 加熱回流30 min，放冷，加氯仿20 ml，繼續(xù)加熱回流 1 h，立即冷卻，轉移置分液漏斗中，分取氯仿層，酸 水層再用氯仿振搖提取3次，每次20 ml，合并氯仿 液，80~C水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至20 Hll 量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜 (0．45 Ixm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
2．4 專屬性試驗精密吸取對照品溶液、供試品溶 液各10 l，分別注人高效液相色譜儀，按含量測定 的方法測定。結果，供試品溶液色譜中，被測成分 在對照品溶液色譜相應的位置上，有相同的保留時 間的色譜峰。(見圖1)。
2．5 線性考察精密稱取蘆薈大黃素對照品適量， 加甲醇定容至100 ml容量瓶中，超聲使完全溶解， 制得蘆薈大黃素對照品母液(濃度為0．1549 mg／ m1)。精密量取蘆薈大黃素對照品母液1、2、4、6、8、 10 ml，分別置20 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖 勻。分別精密吸取10 ，注入高效液相色譜儀，記 錄峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪 制標準曲線�；貧w方程：Y=3．78 X 104X一2．94 X 10— 3X，r=0．999 9，上述結果表明，蘆薈大黃素進樣量 在7．745—77．45 g范圍內線性關系良好。
2．6 精密度試驗精密吸取同一供試品溶液，在上 述色譜條件下連續(xù)進樣6次，測定蘆薈大黃素峰面 積，結果RSD=1．5％ 。
2．7 重復性試驗精密稱取同一批番瀉葉樣品6 份，按供試品溶液制備方法制備，測定計算，RSD= 2．0％ 。結果表明本法重復性良好。
2．8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液10 l，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣測定，按供試品溶 液中蘆薈大黃素含量計算，RSD：0．3％ 。結果表 明，供試品溶液在12 h內基本穩(wěn)定。
2．9 加樣回收試驗取同一批已知蘆薈大黃素含 量的樣品(批號6008)6份，每份1 g，分別加入蘆薈大黃素對照品母液(83．08 m1)各7．0 ml，揮干溶 劑，按供試品溶液的制備方法制備，測定，平均回收 率為96．13％ ，RSD為2．2％ 。結果表明本法回收率 比較好。(見表1)。
3 討論
3．1 檢測波長的選擇取蘆薈大黃素對照品掃描 測定，結果在254 nm處有最大吸收，因此選擇254 nm為本品的測定波長。
3．2 色譜條件的考察試驗中考察了依利特ODS2 (200 mm X4．6 mm，5 m)、迪馬C】8(200 mm X 4．6 mm，5 m)、奧太C18(250 mm X4．6 mm，5 m)3種 品牌的色譜柱測定，結果無明顯差異。流動相的考 察參考文獻 j，分別用0．1％ 、0．2％磷酸溶液與甲 醇混合流動相溶解對照品，結果隨磷酸濃度增高， 蘆薈大黃素對照品的溶解度增加，因此確定流動相 為以甲醇-0．2％ 磷酸溶液(70：30)。柱溫的考察， 分別考察了25 oC、30~C、40~C柱溫對色譜分離的影 響，在一般情況下，隨柱溫升高，蘆薈大黃素與雜質峰分離度下降，實際檢驗中應根據(jù)樣品分離情況在 25cC一40cC范圍內選擇適宜的柱溫。
3．3 超聲、和水浴時間的考察，對超聲處理20，30， 40 min，和水浴回流15，30，45 min制備的供試品溶 液進行考察。結果顯示，超聲處理30，40 min，水浴 回流30，45 min結果差異都不大，故選擇超聲處理 30 min，和水浴回流30 min。蘆薈大黃素屬于蒽醌 類，遇熱易升華 j，故選擇氯仿液在80o【=水浴蒸干。
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HPLC測定番瀉葉提取物中蘆薈大黃素的含量 NEWS
