金銀花提取物木犀草甙的含量測(cè)定 | 金銀花提取物木犀草甙的含量測(cè)定 |
| 發(fā)布時(shí)間:2015-04-06 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2809 |
金銀花為常用中藥，來(lái)源于忍冬科植物忍冬 (Lonicerajaponica Thunb．)的干燥花蕾或帶初開的 花，具有清熱解毒、散風(fēng)消腫的功能。中國(guó)藥典 2000年版一部該品種項(xiàng)下測(cè)定綠原酸的含量，2005 年版新增了高效液相色譜法測(cè)定有效成分木犀草苷 的含量，而文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定木犀草苷的方法¨ 也主 要是高效液相色譜法，采用c。 柱，流動(dòng)相分別為乙 腈～0．5％醋酸溶液、乙腈一0．04％ 磷酸溶液、乙腈 一0，5％ 磷酸溶液梯度洗脫；甲醇一乙腈一0．4％ 磷 酸溶液等度洗脫。在樣品檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，使用c。 柱測(cè) 定時(shí)樣品色譜圖中木犀草苷色譜峰的前后均有小峰 干擾。調(diào)整流動(dòng)相比例亦無(wú)法使三者的分離度達(dá)到 1．5，不符合藥典要求，很難對(duì)金銀花中所含的木犀 草苷進(jìn)行準(zhǔn)確定量。本文采用C 柱，以0．4％ 磷酸 溶液一四氫呋喃一甲醇(79：1 1：10)為流動(dòng)相，較好地對(duì)金銀花中木犀草苷進(jìn)行分離測(cè)定。
關(guān)鍵詞：木犀草甙 長(zhǎng)沙上禾生物 金銀花提取物 含量測(cè)定 日本島津LC一2010高效液相色譜儀，Phenome— flex Luna C8(250 mm×4．6 mm，5 Ixm)，紫外光譜測(cè) 定用島津2550型單光束紫外分光光度儀。 木犀草甙對(duì)照品供應(yīng)商長(zhǎng)沙上禾生物 網(wǎng)站：www.csnutilities.com 金銀花藥材為市場(chǎng)抽驗(yàn)樣品(批號(hào)：070901， 0700902，070801， 20070818， 070701， 20070401， 070711)。水為去離子水，乙腈、四氫呋喃為色譜 純，磷酸為分析純。 2 溶液制備 2．1 對(duì)照品溶液 精密稱取木犀草苷對(duì)照品 21．37 mg，置50 mL棕色量瓶中，加70％ 乙醇制成 427．4 Ixg·mL 對(duì)照品儲(chǔ)備液。取木犀草苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2 mL于25 mL量瓶中，加70％ 乙醇稀釋 至刻度，再取稀釋溶液3 mL于10 mL量瓶中，加 70％ 乙醇稀釋至刻度，制成10．26 lxg·mL 的對(duì)照 品溶液。 2．2 供試品溶液取本品粉末(過(guò)4號(hào)篩)1 g，精 密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加人70％ 乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)1 h，放冷至室溫，再稱定重量，用70％ 乙醇補(bǔ) 足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。 3 色譜條件 色譜柱：用辛基硅烷鍵合硅膠柱Phenomenex Luna—C8(250 mill×4．6 mm，5 lxm)；流動(dòng)卡目：0．4％ 磷酸溶液一四氫呋喃一甲醇(79：11：10)；流速：1 mL·min～；檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm；柱溫：30 cC；進(jìn)樣 量：10 lxL。在本色譜條件下，理論板數(shù)以木犀草昔 峰計(jì)不低于7000。 4 專屬性考察 精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 L， 注人液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果樣品色 譜圖中木犀草苷峰與前后峰的分離度分別為2．89 和1．99，符合高效液相色譜定量分析的要求。理論 塔板數(shù)以木犀草苷計(jì)為9000以上。 5 線性關(guān)系考察 取濃度為427．4 lxg·mL一的對(duì)照品儲(chǔ)備液適 量，加70％ 乙醇配制得170．96，85．48，34．192， 17．096，10．2576，8．568，3．4272，1．7138，0．8568 lxg ·mL一的系列對(duì)照品溶液，搖勻，分別進(jìn)樣10 L。 以進(jìn)樣量 ( )為橫坐標(biāo)，峰面積積分值y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程為： Y ：2．465×10 X +2．332×10 r=0．9999 表明木犀草苷進(jìn)樣量在0．86—427．4 lxg的范圍內(nèi) 線性良好。 6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液(10．26 lxg·mL )10 L，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得平均峰面 積為934176，RSD為0．71％。結(jié)果表明儀器分析的 重復(fù)性良好。 7 供試品溶液的穩(wěn)定性 精密吸取供試品溶液(批號(hào)20070401)10 lxL， 分別于0，3，6，9，12，15，18，24 h進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得樣 品中木犀草苷的平均峰面積(n：8)為326649，RSD 為1．2％ 。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。 8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次(批號(hào)20070401)的供試品約0．5， 1，1．5 g，精密稱定，按“2．1．2”項(xiàng)下方法制備供試品 溶液，進(jìn)行含量測(cè)定。金銀花提取物木犀草苷含量的平均值為 0．057％ ，RSD為1．4％ 。結(jié)果表明此法重復(fù)性良 好。 9 回收率試驗(yàn) 取同一批已知含量(批號(hào)20070401)的樣品(過(guò) 4號(hào)篩)0．5 g，共9份，每3份為一組，每組分別精密 加人對(duì)照品溶液(427．4 lxg·mL )1．6，2．2，2．8 mL。按“2．1．2”項(xiàng)下方法制備所需溶液，在上述色 譜條件下進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率(n=3)。結(jié)果 金銀花提取物木犀草苷低、中、高3種濃度的回收率分別為 98．50％ ，99．37％ ，102．76％ ；RSD分別為0．69％ ， 0．16％ 。0．15％ 。 10 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地的7批樣品各2份，按“2．1．2”項(xiàng)下 方法制備供試品溶液，按上述色譜條件每份溶液分別 進(jìn)樣2次，進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表1。 l1 討論 采用C 柱，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行選擇：首先采用中國(guó) 藥典金銀花項(xiàng)下流動(dòng)相系統(tǒng)(乙腈一0．5％ 醋酸溶 液)，但效果不理想；采用文獻(xiàn)報(bào)道 的流動(dòng)相系 統(tǒng)：乙腈一0．04％磷酸溶液、乙腈一0．5％磷酸溶液、 甲醇一乙腈一0．4％磷酸溶液、0．4％磷酸溶液～四 氫呋喃一甲醇，結(jié)果目標(biāo)檢測(cè)峰木犀草苷與前后峰 的分離度均小于1．5，不符合藥典規(guī)定。在流動(dòng)相 系統(tǒng)改變未能達(dá)到目的的情況下，實(shí)驗(yàn)中純化供試 品溶液，以期減小其他雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)檢測(cè)峰的影響：樣 品用70％ 乙醇超聲提取后蒸干、水溶，分別用乙酸 乙酯、水飽和的正丁醇提取、通過(guò)聚酰胺柱洗脫、通 過(guò)D101大孔樹脂柱洗脫的方法進(jìn)行純化，結(jié)果未 能得到有效改善，液相色譜圖中目標(biāo)檢測(cè)峰的分離 度仍然達(dá)不到1．5。 進(jìn)一步對(duì)色譜柱進(jìn)行篩選，分別采用C 柱 (Agilent SB—Cl8；Phenomenex ODS一3；依利特Kro— masil Cl8)、辛基硅烷鍵合硅膠柱(Phenomenex Luna — C8；Agilent SB—C8)、苯基柱(Agilent SB—Pheny1) 對(duì)供試品溶液(按中國(guó)藥典方法制備)作色譜分離 (采用中國(guó)藥典金銀花項(xiàng)下流動(dòng)相系統(tǒng))，結(jié)果以C 柱的分離效果較好，目標(biāo)檢測(cè)峰的分離度基本達(dá)到 1．5；再對(duì)流動(dòng)相系統(tǒng)及供試品溶液制備方法進(jìn)行優(yōu) 化，最終確定了采用本文的流動(dòng)相系統(tǒng)及溶液制備 方法效果最佳。 存在問(wèn)題：由于目標(biāo)峰附近的小峰可能與目標(biāo) 峰化合物結(jié)構(gòu)相似，按照2005年版中國(guó)藥典規(guī)定的方法無(wú)法使目標(biāo)峰呈單峰狀態(tài)分離，要么與前面小 峰相連，要么與后面小峰相連，以致不能準(zhǔn)確定量， 實(shí)驗(yàn)中反復(fù)篩選，最終選擇出能使目標(biāo)峰與前后小 峰完全分離的條件，即文中敘述條件，存在的缺陷是 保留時(shí)間較長(zhǎng)，達(dá)47．7 rain，這將在我們今后的工作 中進(jìn)一步研究、改善。 金銀花提取物木犀草甙供應(yīng)商長(zhǎng)沙上禾生物 www.csnutilities.com
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