RP—HPLC法測定蘆薈汁（蘆薈提取物）中蘆薈苷和蘆薈大黃素含量 | RP—HPLC法測定蘆薈汁（蘆薈提取物）中蘆薈苷和蘆薈大黃素含量 |
| 發(fā)布時間:2015-04-06 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2810 |
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RP—HPLC法同時測定蘆薈汁中蘆薈苷和蘆薈大黃素的含量 摘 要:建立了應(yīng)用RP—HPLC法同時測定蘆薈汁中蘆薈苷和蘆薈大黃素含量的方法．流動相：甲醇-水（55：45）；檢測波長：225nm；線性范圍：蘆薈苷為0．0162μg～0、162μg，r=-0.9998，蘆薈大黃素為0．0066μg～0.066μg，r=0．9997；平均回收率：蘆薈苷為101．13％，RSD1．39％，蘆薈大黃素為100.05％，RSD1.28％。該方法靈敏，準確，簡便快速. Simultaneous Determination for Aloin and Aloe-emodin in Aloe Juice by RP- HPLC Abstract:A new simultaneous determination for aloin and aloe-emodin in Aloe iuice by RP-- HPLC was established. The mobile phase consisted of methanol-water（55：45） and detection was at 225nm;the established method was linear in the range of 0.0162μg～0.162μg（r=-0.9998） for aloin and was linear in the range of 0.0066 μg～ 0.066 μg （r=-0.9997） for aloe-emodin;the average recovery was 101.13% with 1.39% of RSD for aloin and was 100.05% with 1.28% of RSD for aloin .The method was sensitive,simple and accurate. Key words:RP-HPLC, Aloin, Aloe-emodin, Simuhaneousdetermination 蘆薈，拉丁名為ALoe，屬百合科多年生常綠肉質(zhì) 植物，是大自然賜予人類的仙丹草，具有抗腫瘤、通 便、抗菌等作用¨1。蘆薈苷和蘆薈大黃素為蘆薈的主要 有效成分，蘆薈苷氧化降解分解為苷元一蘆薈大黃素。 蘆薈苷和蘆薈大黃素各有其獨特的藥性 1，蘆薈汁中 含有一定量的蘆薈苷和蘆 薈大黃素，因此測定各自 含量變化很有必要，而應(yīng) 用RP—HPLC法同時測定 蘆薈樣品中蘆薈苷和蘆薈 大黃素的含量尚未見報 道。本文建立了同時測定 蘆薈汁中蘆薈苷和蘆薈大 黃素的含量的方法，簡便 快速，得到了滿意的效果。
蘆薈苷 1 實驗部分 1．1儀器、試劑與材料 Waters2996型HPLC儀(美國Waters公司)； K0— 250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有 限公司)。 蘆薈苷、蘆薈大黃素生產(chǎn)供應(yīng)商：長沙上禾生物 www.csnutilities.com 甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水。 蘆薈汁(沈陽某公司提供)。 1．2色譜條件 色譜柱為YWGC18(200ram x 4．5mm，5 m)；流 動相：甲醇一水(55：45)；流速：1mL／min；檢測波 長：225nm；柱溫：3O℃。 1．3 標準曲線的制備及最低檢測限 分別精密稱取蘆薈苷和蘆薈大黃素各5．6mg、 3．3mg，定容稀釋，然后混合成同時含有蘆薈苷和蘆薈大黃素的標準溶液，蘆薈苷濃度為l6．2 咖L，蘆薈 大黃素濃度為6．6 IxK／mL．分別進標樣lO ，8 ， 6 ，4 IxL，2 IxL，l ，根據(jù)進樣量(Y)與吸收 面積fx)作標準曲線，得回歸方程，蘆薈苷：Y：7．27 X 10—7X一3．1 X 10—4 r=-0．9998，線性范圍：0．0162 ～ 0．162 。蘆薈大黃素：Y=I．85 X 10—7X一2．74 X 10 — 5 r=0．9997，線性范圍：0．0066 ～0．066 。 在選用的色譜條件下，用濃度稀釋法(mg／L)l，0． 5，0．2，0．1，0．05，0．02，按信噪比為3時，即以噪聲 的3倍峰高時所對應(yīng)的蘆薈苷和蘆薈大黃素含量為最 低檢測限，濃度分別為0．08 mg／L和0．05 mz-／L，換算成 絕對進樣量為0．8ng和O．5ng，說明方法的靈敏度較高。 1．4 樣品測定方法 直接采用原汁進樣(孔徑0．45 m的濾膜過濾)， 進樣量lO ，測其吸收面積(n=3)，然后按照標準 曲線中的回歸方程計算其含量，并進一步換算成樣品 中蘆薈苷和蘆薈大黃素體積百分含量。蘆薈汁色譜圖 見圖1。
圖1蘆薈汁色譜分離圖 1：蘆薈苷2：蘆薈大黃素 2 結(jié)果與討論 2．1 檢測波長的選擇 作者采用以甲醇為溶劑，對蘆薈苷、蘆薈大黃素進行紫外一可見掃描，蘆薈苷在225，269，298， 359nm有吸收峰，蘆薈大黃素在225，254，436nm處有 吸收峰，其中均以225nm吸收值最高，因此建立了一 種同時測定蘆薈樣品中蘆薈苷和蘆薈大黃素的高效 液相色譜分析方法，即把檢測波長定在225nm處可 以同時測定蘆薈苷和蘆薈大黃素的含量。 2．2 方法精密度實驗 取某一濃度對照品，測其吸收面積(進標樣 l0 ，n=6)，計算精密度，結(jié)果蘆薈苷RSD為1．24％， 蘆薈大黃素RSD為1．05％ 2．3對照品穩(wěn)定性實驗 把對照品放在冰箱中存放(4cIC)，分別在0、2、 4、8、12、24h測同一濃度樣品的吸收面積(進標樣l0 L，n=6)，蘆薈苷峰面積的RSD為1．9l％，蘆薈大黃 素峰面積的RSD為1．76％，表明對照品溶液在24h內(nèi) 基本穩(wěn)定。 2．4 加標回收率實驗 在已測得蘆薈苷、蘆薈大黃素含量的蘆薈汁樣品 中加入一定量的蘆薈苷和蘆薈大黃素標品，按照測定 方法，測其吸收面積，換算成質(zhì)量，并進行回收率計 算。蘆薈苷：平均回收率為101．13％，RSD為1．39％。 蘆薈大黃素：平均回收率為100．05％，RSD為1．28％。 2．5 方法重復性實驗 對同一批號的蘆薈汁平行測定6次，測其吸收面 積，得其相對標準偏差，蘆薈苷：1．13％蘆薈大黃素： 1．18％。表明此方法能夠重復操作。 2．6 樣品測定結(jié)果與分析 對不同生產(chǎn)日期(批號)的蘆薈汁進行蘆薈苷和 蘆薈大黃素含量的測定，結(jié)果列于表1： 表1不同批號蘆薈汁中蘆薈苷和蘆薈大黃素的測定結(jié)果(n=3)
分析不同批號蘆薈汁中蘆薈苷、蘆薈大黃素的含 量可知，隨著蘆薈汁的保存時間的增加，蘆薈苷的含 量不斷減少，而蘆薈大黃素的含量相應(yīng)的不斷增加， 原因在于：蘆薈原汁長久放置，其中蘆薈苷被氧化分 解，一部分變成了蘆薈大黃素，所以導致了以上結(jié)果。
蘆薈苷、蘆薈大黃素生產(chǎn)供應(yīng)商：長沙上禾生物 www.csnutilities.com |
