和厚樸酚(honokio)注射劑制備工藝和含量測定的研究 | 和厚樸酚(honokio)注射劑制備工藝和含量測定的研究 |
| 發(fā)布時間:2015-04-15 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):1938 |
和厚樸酚(honokio1)是我國傳統(tǒng)中藥厚樸(Magnolia of— ficinalis Rehd．et Wils．)與凹葉厚樸(M．officinalis Rehd．et wils．"／．Jar．biloba Rehd．et wils．)中提取分離得到的木脂素 類化合物，具有肌肉松弛[ 、抗焦慮[ 、中樞抑制[ 、抗氧 化[ ·5·6· 、抗心律失常[8· 、抗腫瘤[10,II]等多種藥理活性。 關鍵詞： 和厚樸酚(honokio) 中藥厚樸 注射劑 上禾生物 1 儀器與試藥 1．1 儀器 高效液相色譜系統(tǒng)：WatersSlO型泵；島津SPD-10Avp 型UV—VIS檢測器；81—2型恒溫磁力攪拌器；DHP一781型電 熱恒溫培養(yǎng)箱；Denverl／10萬分析天平。 1．2 試藥 和厚樸酚(honokio1)對照品(中國藥品生物制品檢定所)；和厚樸酚 (本室提供，含量≥99％)；A1(SE，AR，天津天泰精細化學品 有限公司)A2(F68，AR，沈陽藥科大學藥廠)；A3(EL，BASF 公司)；BI(甘油)、B2(乙醇)、B3(二甲基乙酰胺)、甲醇均為分 析純(北京化工廠)；O。(亞硫酸氫鈉，AR，浙江省永嘉縣化工 試劑廠)；02(亞硫酸鈉，AR，北京化工廠)；03(維生素C， AR，北京求賢化工試劑廠)；重蒸水(自制)。 2 方法與結果 2．1 實驗設計 分別選用3種增溶劑A。、A2、A3，3種助溶劑B。、B2、B3， 3種抗氧劑O1、02、03和3個pH值6、7、8，按照正交試驗方 法共設計9組試驗，以和厚樸酚的溶解程度、稀釋后溶液的 澄明度以及穩(wěn)定性試驗結果為依據(jù)篩選處方。 2．2 配制工藝 精密稱取和厚樸酚(honokio)適量置于三角瓶內，加入增溶劑A 和助溶劑B各適量，攪拌至和厚樸酚完全溶解，將抗氧劑O 溶解于適量水中，加入至上述溶液中，攪拌均勻，再加適量水至一定體積。調pH值到設定條件。所制得的注射液過0． 45 m的微孔濾膜，充氮氣，灌封，100℃ 的水浴中常壓煮沸 30min滅菌，即得。 2．3 和厚樸酚的溶解性考察 試驗結果表明：在1，4，5號樣品中，和厚樸酚不能完全 溶解，溶液渾濁。取2，3，6，7，8，9號樣品分別稀釋于適量生 理鹽水中，6號樣品出現(xiàn)渾濁。 2．4 和厚樸酚注射液穩(wěn)定性考察 將2，3，7，8，9號樣品分別置100℃ 下進行3周高溫穩(wěn)定 性試驗。以溶液顏色與和厚樸酚的含量為依據(jù)進行篩選。 3、7號試驗組在放置24h后，溶液顏色變?yōu)樯钭厣?、8、9 號試驗組在100℃加速條件下考察制劑穩(wěn)定性，三周內制劑 溶液顏色無變化。其含量測定結果表明2號試驗組的含量 保持穩(wěn)定，8、9號試驗組的含量逐漸降低。 2．5 處方篩選 根據(jù)以上實驗結果，確定和厚樸酚注射劑的處方為：和 厚樸酚500mg，增溶劑A。(SE)、助溶劑B2(乙醇)，抗氧劑02 (亞硫酸鈉)適量，調節(jié)pH值到7，加入重蒸水到125mL。 3 含量測定方法的建立 3．1 對照品溶液的配制 精密稱取和厚樸酚對照品適量， 加甲醇制成每1mL含0．1mg的溶液。 3．2 色譜條件Diamonsil C18柱(5腫，4．6mm×250mm)色 譜柱；甲醇一0．05％磷酸二氫鉀(77：23)的流動相。流速 1．0mL·min-。；室溫；進樣量10pL；檢測波長294nm。在上 述條件下其它成分對和厚樸酚的測定無干擾。 3．3 線性關系的考察 將和厚樸酚對照品溶液經0．45 m微孔濾膜濾過，分別 精密吸取續(xù)濾液2，4，8，12，16，20pm注入高效液相色譜儀， 記錄峰面積。以和厚樸酚進樣量對峰面積進行線性回歸。得 標準曲線方程為C=4．4675×10一 A+3．0369×10～ ．r= 0．9998。線性范圍為0．208～2．08pg。 3．4 精密度實驗 精密移取和厚樸酚注射液0．50mL置10mL量瓶內。加 甲醇稀釋至刻度。濾過，精密吸取6btL進樣，連續(xù)測定5次。計算精密度，結果表明：樣品精密度RSD=0．86％，說明精 密度良好。 3．5 穩(wěn)定性實驗 精密移取和厚樸酚注射液0．30mL置于10mL量瓶內， 加甲醇稀釋至刻度。照上述方法于1日內每小時測定，計算 8h內的穩(wěn)定性。結果表明：樣品日內穩(wěn)定性RSD：1．18％。 按照上述方法分別于5日內連續(xù)測定，記錄峰面積，計 算樣品日間穩(wěn)定性。結果表明：樣品日間穩(wěn)定性RSD： 0．37％。和厚樸酚注射液樣品在5d內穩(wěn)定。 3．6 加樣回收率實驗 精密量取和厚樸酚注射液0．25mL置于10mL量瓶內， 共6份，其中5份加入適量和厚樸酚對照品溶液，1份作為 空白，分別用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0．45t~m微孔濾膜過 濾，精密吸取續(xù)濾液10／~L進樣。計算和厚樸酚的回收率，見 表1。和厚樸酚注射液的加樣回收率在99．41％～100．79％ 之間，平均加樣回收率為(100．14±0．54)％，符合95％～ 105％的要求。 3．7 重現(xiàn)性實驗 取和厚樸酚注射液，精密移取0．25mL置于10mL量瓶 內，共6份，分別加甲醇稀釋至刻度，按照上述方法測定。和厚樸酚注射液重現(xiàn)性RSD=1．34％，(n=3)，重現(xiàn)性良好。 3．8 含量測定 分別精密稱取3批和厚樸酚注射液0．25mL 3份置于 10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0．45t~m微孔濾 膜過濾，即得供試品溶液。精密吸取供試品溶液10／~L進樣， 計算和厚樸酚含量，見表2。 4 討論 4．1 厚樸作為常用中藥，具有燥濕消痰、下氣除滿等功效。 用于濕滯傷中、脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳。 研究表明口服和厚樸酚的生物利用度低，只有少量原型藥物 吸收，因此口服給藥主要作用于消化道。藥理研究表明和厚樸酚具有抗焦慮、中樞抑制、保護心肌、抗心律失常、保護大 腦、抗腫瘤等活性。所以我們認為給藥途徑是影響藥效的一 個重要因素，為此設計制備了和厚樸酚注射劑。 和厚樸酚為木脂素類化合物，在有機溶劑中有良好的溶 解性，但在水中的溶解度很小；并且和厚樸酚長期放置于空氣中容易氧化。以上特性均不利于注射劑的制備，因此我們 選用增溶劑、助溶劑以及抗氧劑制備和厚樸酚注射劑，使和 厚樸酚能夠達到有效的治療劑量，并能夠保持藥物穩(wěn)定。 4．2 本文采用了100℃ 下進行處方穩(wěn)定性篩選的試驗條 件，在此苛刻的條件進行3周試驗，處方8、9和厚樸酚含量 呈下降趨勢，而處方2的和厚樸酚含量保持穩(wěn)定，說明該處 方有良好的穩(wěn)定性，適合用于制備和厚樸酚注射液。 4．3 本文建立了和厚樸酚注射劑中和厚樸酚含量測定的 RP—HPLC法。在該液相色譜條件下和厚樸酚的測定不受干 擾，峰形對稱，該方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可作為和厚樸酚注射劑質量的檢測方法。 |
