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    花生(ArachishypogaeaL．)屬豆科一年生草本科植物，花生殼是其莢果外殼。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)花生在加工過(guò)程中每年將產(chǎn)生數(shù)百萬(wàn)噸花生殼，除了很少部分被用于飼料加工、食用菌栽培、藥品生產(chǎn)外，絕大部分都被當(dāng)作燃料使用或廢棄物丟棄，資源利用率非常低t 。然而，研究表明花生殼中除含有碳水化合物和粗纖維外，還含有豐富的黃酮類 木犀草素(Luteolin)化合物�，F(xiàn)代科學(xué)研究證明，木犀草素具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗癌癥、抗衰老、抑制高血壓高血脂及預(yù)防心血管疾病等多種藥理作用 。因此，對(duì)花生殼中木犀草素的研究與利用越來(lái)越受到人們的重視，其在食品、醫(yī)藥、保健品和化妝品等領(lǐng)域也將具有廣闊的應(yīng)用前景 。目前花生殼中木犀草素的提取主要采用水浸提、堿性水浸提和乙醇提取嗍，這些方法常存在提取效率低的不足，因此對(duì)其提取方法還有待于進(jìn)一步的研究。微波法輔助提取(Microwave assisted extraction，MAE) 系指利用利用介電損耗和離子傳導(dǎo)的原理，根據(jù)不同結(jié)構(gòu)物質(zhì)吸收微波能力的差異，對(duì)某些組分選擇性加熱，可使被萃取物質(zhì)從體系中分離而進(jìn)入萃取劑中的方法。該方法具有質(zhì)量穩(wěn)定、產(chǎn)量大、選擇性高、節(jié)省時(shí)間且溶劑用量少、能耗較低的優(yōu)點(diǎn)。為此，本試驗(yàn)對(duì)微波法輔助提取應(yīng)用于花生殼中木犀草素提取的相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了研究，并應(yīng)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對(duì)相關(guān)參數(shù)條件進(jìn)行了優(yōu)化篩選，以期優(yōu)化篩選出花生殼中木犀草素微波法輔助提取的最佳提取工藝參數(shù)條件。

關(guān)鍵詞：木犀草素  花生殼提取物  長(zhǎng)沙上禾生物   微波提取

1儀器及試藥

1．1儀器

R201L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)，DJ．02 粉碎機(jī)(上海淀久中藥機(jī)械制造有限公司)，溫控式微波化學(xué)反應(yīng)器(南京旋光科技有限公司)，R201L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海申生科技有限公司)，Waters2487型高效液相色譜儀 (美國(guó)Waters公司)，微量移液器(2z海求精生化試劑儀器有限公司)。

1．2試藥

檸檬酸、95％vol乙醇均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；含量測(cè)定用磷酸、甲醇均為色譜純(江蘇漢邦科技有限公司)；木犀草素標(biāo)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：14075．200907)。木犀草素（長(zhǎng)沙上禾生物科技有限公司）

花生殼：花生果產(chǎn)于江蘇省淮安市，手工剝殼，粉碎后備用。

木犀草素生產(chǎn)企業(yè)：長(zhǎng)沙上禾生物

2試驗(yàn)方法與結(jié)果

2．1花生殼中木犀草素的微波輔助提取工藝將將花生殼藥材粉碎至20~40目粉末備用。稱取適量的花生殼粗粉置于提取容器中，向提取容器中加入一定量的60％vol乙醇水溶液，微波照射一定時(shí)間后，置于80℃恒溫水浴鍋中提取一定時(shí)間后，抽濾，濾渣重復(fù)提取2次數(shù)后，合并濾液，將濾液轉(zhuǎn)至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，于(65±5)oC條件下真空濃縮回收乙醇攜帶劑至半浸膏，取出半浸膏，于 (65±5)oC條件下真空干燥，干浸膏經(jīng)粉碎后得木犀草素樣品粉末。

2．2木犀草素含量測(cè)定

2．2．1色譜條件

色譜柱：Kromsil—C18柱(250mmx6mm，0．5 txm)，流動(dòng)相為甲醇．0．4％磷酸溶液(40：60)，流速為1．0mL／min，柱溫為 3OqC，進(jìn)樣量為10txL，檢測(cè)波長(zhǎng)(入)為350rimt“】。在該條件下能達(dá)到基線分離，其色譜圖見(jiàn)圖1。

2．2．2溶液配制

① 對(duì)照品溶液的配制：精密稱取木犀草素對(duì)照品 25．00mg，用適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度為lmg／mL的木犀草素對(duì)照品溶液。

②供試品溶液的配制：精密稱取木犀草素樣品10．00rag (m樣品)，用適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。

2．2．3線性關(guān)系考察

準(zhǔn)確吸取0．5mL、1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL木犀草素對(duì)照品溶液于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按“2．2．1’頌色譜條件測(cè)定，以木犀草素峰面積積分值(Y)對(duì)木犀草素檢測(cè)濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=205744X+4653(r=O．9994)。結(jié)果表明，木犀草素檢測(cè)濃度在10 l00 咖L范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2．2．4穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2．2．1’色譜條件，對(duì)同一供試品溶液3h內(nèi)每隔10min 進(jìn)樣測(cè)定1次。RSD=I．29％(n=18)，表明木犀草素供試品溶液在3 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2．2．5加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取50．00mg已知含量的木犀草素樣品9份，分別加入木犀草素對(duì)照品4．00mg，用適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至 100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，按“2．2．1”色譜條件測(cè)定。木犀草素平均回收率為99．14％， RSD=1．19％ 。

2．2．6精密度試驗(yàn)

精密吸取木犀草素對(duì)照品溶液3．OmL，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。按‘2．2．1’色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次。RSD=I．12％ 5)，表明儀器精密度良好。

2．2．7樣品含量測(cè)定

按“2．2．1”色譜條件測(cè)定，將供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定，將測(cè)定結(jié)果代入“2．2_3”項(xiàng)下回歸方程計(jì)算供試品溶液中木犀草素含量，按下式計(jì)算樣品中木犀草素含量。 C樣 = ×100％ m

2．3微波輔助提取花生殼中木犀草素的工藝篩選指標(biāo)由于各試驗(yàn)所得木犀草素樣品的含量(X)是考察木犀草素品質(zhì)的主要指標(biāo)，具有質(zhì)量控制意義；而花生殼中 木犀草素樣品的提取率(Y)在工業(yè)生產(chǎn)上具有經(jīng)濟(jì)控制意義，故對(duì)各提取工藝方法優(yōu)化篩選的最終考察指標(biāo)為 木犀草素樣品含量x與木犀草素樣品提取率Y的算術(shù)平均值Z。

2．4微波輔助提取花生殼中木犀草素的參數(shù)條件的篩選

2．4．1微波輔助提取花生殼中木犀草素的單因素試驗(yàn)考察根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，得知影響微波輔助提取法提取花生殼中 木犀草素的主要因素有微波時(shí)間、料液比、提取時(shí)間。為了便于微波輔助提取法提取花生殼中木犀草素工藝優(yōu)化試驗(yàn)的進(jìn)行，試驗(yàn)對(duì)這些因素進(jìn)行了單因素的影響考察。

(1)微波時(shí)間對(duì)花生殼中木犀草素微波輔助提取的影響按“2．1”提取工藝，控制提取條件為：按照料液(60％vol 乙醇)比為1：3(w／v)，微波照射時(shí)間為0．5min、1．0min、 1．5min、2．0min、2．5min、3．0min、3．5min、4．0min，水浴鍋中提取時(shí)間為2h，考察“微波時(shí)間對(duì)花生殼中木犀草素酶法輔助提取的影響”，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。

由圖2可知，在保持其他條件不變的前提下，當(dāng)微波時(shí)間小于2．0ram時(shí)，花生殼中木犀草素微波輔助提取的z值隨微波時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增大，當(dāng)微波時(shí)間為2．0mLn時(shí)z 值最大，為3．57％，但是，當(dāng)微波時(shí)間大于2．0rnin時(shí)，z值卻逐漸減小，微波時(shí)間為1．5min~2．5min~Z值變化顯著，因此，本因素宜選擇提取次數(shù)為1．5min、2．0min、2．5min 3個(gè)水平來(lái)應(yīng)用正交試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步考察。

(2)料液比對(duì)花生殼中木犀草素微波輔助提取的影響按“2．1”提取工藝，控制提取條件為按照料液(60％vo1 乙醇)比為1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7(w／v)，微波照射時(shí)間為1．5min，水浴鍋中提取時(shí)間為2h，考察“料液比對(duì)花生殼中木犀草素酶法輔助提取的影響”，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3。由圖3可知，在其他因素不變的前提下，隨著料液比的增加，提取的Z值逐漸增大，但是從曲線的變化趨勢(shì)來(lái)看，當(dāng)料液比大于1：4時(shí)提取Z值變化不明顯，因此，從成本節(jié)約角度和工業(yè)化角度考慮，本因素宜選擇料液比為1：4、l：5、1：6 3個(gè)水平來(lái)應(yīng)用正交試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步考察。

(3)提取時(shí)間對(duì)花生殼中木犀草素微波輔助提取的影響按“2．1’’提取工藝，控制提取條件為按照料液(60％vol 乙醇)比為1：4(w／v)，微波照射時(shí)間為1．5min，水浴鍋中提取時(shí)間為0．5h、lh、2h、3h、4h、5h、6h、7h，考察“提取時(shí)間對(duì)花生殼中木犀草素酶法輔助提取的影響”，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖4 由圖4可知，在保持其他條件不變的前提下，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，花生殼中木犀草素微波輔助提取的Z值逐漸增大，但從變化的趨勢(shì)來(lái)看，當(dāng)提取時(shí)間超過(guò)3h以后曲線較平坦，z值變化不大，從縮短提取時(shí)間上考慮，本 素宜選擇提取時(shí)間為3h、4h、5h 3個(gè)水平來(lái)應(yīng)用正交試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步考察。

2．4．2微波輔助提取花生殼中木犀草素工藝參數(shù)的正交試驗(yàn)考察

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)對(duì)影響微波輔助提取花生克：I1木犀草素的3個(gè)主要因素(微波時(shí)間、料液比、提取時(shí)問(wèn))各取3個(gè)水平，選用L (39正交表進(jìn)行試驗(yàn)。各因素水平表見(jiàn)表l，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及極差分析結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

從表2可知，極差數(shù)據(jù)：R >R2>R3，表明3個(gè)因素對(duì)花生殼中木犀草素提取影響大小順序?yàn)锳>B>C。表明花生殼中木犀草素提取的最佳提取工藝條件為A2B C：。表3的方差分析結(jié)果表明，A因素的PO．05，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響不顯著。

2．4．3工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

按花生殼中木犀草素的微波輔助提取工藝和正交試驗(yàn)優(yōu)化出最佳工藝參數(shù)條件，重復(fù)提取3批木犀草素樣品，測(cè)定和計(jì)算z，以考察所篩選的工藝參數(shù)條件是否最佳。結(jié)果顯示，3批木犀草素樣品的z值分別為4．77％、4．74％、 4．82％，RSD=3．29％(n=3)，均超過(guò)正交試驗(yàn)中的最大值，表明所篩選出的提取工藝參數(shù)條件為花生殼中木犀草素 微波輔助提取的最佳工藝條件，工藝的穩(wěn)定性良好。

2．5花生殼中木犀草素的微波輔助提取與乙醇回流法提取的效果比較

對(duì)相同的花生殼原料，按“2．1”微波輔助提取工藝及 “2．4”篩選的最佳工藝條件，制備木犀草素樣品；并同時(shí)按照乙醇回流 2]制備木犀草素樣品。對(duì)1；1~2種提取工藝方法所得樣品的含量()()、收率(Y)及綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)(Z)以考察所篩選的工藝條件是否最佳。結(jié)果見(jiàn)表4。

從表4可知，微波輔助提取工藝提取花生殼中木犀草素其樣品品質(zhì)遠(yuǎn)高于乙醇回流法，含量為乙醇回流法的8．62倍，其綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)(z)為后者的4．53倍。

3小結(jié)與討論

3．1由表2的極差分析結(jié)果可以看出，花生殼中木犀草素 微波輔助提取的最佳工藝條件為A2B，C：，即微波時(shí)間為 2．0min，料液比為1：6，提取時(shí)間為4h。由表3的方差分析結(jié)果得出，A因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響顯著。工藝驗(yàn)證試驗(yàn)表明，試驗(yàn)優(yōu)化出的工藝參數(shù)條件為花生殼中木犀草素微波輔助提取的最佳工藝條件，工藝的穩(wěn)定性良好。此外，由表4 的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，篩選出的工藝方法明顯優(yōu)于乙醇回流提取的文獻(xiàn)方法，表明試驗(yàn)所篩選的工藝方法在木犀草素的實(shí)際提取中可行，值得推廣應(yīng)用。

3．2微波處理時(shí)間對(duì)花生殼中木犀草素的提取有很大影響，時(shí)間短有效成分在溶劑中不能達(dá)到平衡，溶解量小，提取效果較差；微波處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)木犀草素會(huì)分解轉(zhuǎn)化，提取效果同樣較差，提取量低。此外，本次試驗(yàn)由于受條件的限制對(duì)微波功率未考察，對(duì)此有待于進(jìn)一步研究。

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