天然苦杏仁提取物苦杏仁苷的研究進展 | 天然苦杏仁提取物苦杏仁苷的研究進展 |
| 發(fā)布時間:2018-04-15 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):1824 |
苦杏仁苷是傳統(tǒng)中藥苦杏仁中的有效成分，人們對它的研究已有近200年的歷史，早在1803年Schrader在研究苦杏仁成分時就發(fā)現(xiàn)了此類物質(zhì)，直到1830年Robiquet等從中分離出苦杏仁苷，迄今它已成為醫(yī)藥上常用的祛痰止咳劑、輔助性抗癌藥物，苦杏仁苷廣泛存在于杏、桃、李子、蘋果、山楂等多種薔薇科植物果實的種子中，尤其在苦杏仁中含量較多，大約在2%～3%�？嘈尤受辗肿佑�1單元苯甲醛、1單元氫氰酸和2單元葡萄糖組成，分子式為C20H27NO11。 1 苦杏仁苷的藥理學(xué)研究進展 1.1 鎮(zhèn)咳平喘作用 苦杏仁苷內(nèi)服后，可在體內(nèi)分解為氫氰酸和苯甲醛，氫氰酸對呼吸中樞可產(chǎn)生一定的抑制作用，使呼吸運動趨于安靜而達到鎮(zhèn)咳平喘的作用�？嘈尤受諏τ退嵝秃粑狡劝Y動物可促進肺表面活性物質(zhì)的合成，并使病變得到改善。 1.2 抗腫瘤作用 苦杏仁苷具有良好的抗腫瘤作用，被用作治療癌癥的輔助藥物。將苦杏仁苷制劑用于晚期癌癥患者的治療，可使癥狀改善，存活期延長。將苦杏仁苷用于癌性胸水的治療，發(fā)現(xiàn)苦杏仁苷對癌性胸水有一定程度的控制和緩解作用。將苦杏仁苷按300mg·kg-1，400 mg·kg-1，600 mg·kg-1劑量給移植性肝癌小鼠腹腔注射10～14d，其肝癌治愈率分別為72%，60.8%，61%。移植性肝癌小鼠肝臟微粒體細胞色素P-450含量比正常小鼠顯著下降。當苦杏仁苷給藥10d，腫瘤生長被抑制的小鼠P-450含量達到正常水平�？嘈尤受諏ψ訉m頸癌JJC26株的抑制率為50%～70%。苦杏仁苷及其水解所產(chǎn)生的氫氰酸和苯甲醛體外測試均被證明有抗癌作用，癌細胞內(nèi)硫氫化酶較正常細胞少，因此對苦杏仁苷水解釋放出氫氰酸的解毒能力較差，苦杏仁苷加苯甲醛或苦杏仁苷加β-葡糖苷酶可明顯提高抗癌效力，已發(fā)現(xiàn)癌細胞無氧酵解占優(yōu)勢，其產(chǎn)物乳酸形成的偏酸性環(huán)境有利于提高β-葡糖苷酶的活性，促使苦杏仁苷在癌細胞中水解出較多的氫氰酸和苯甲醛而發(fā)揮更強的抗癌作用。 1.3 對消化系統(tǒng)的影響 苦杏仁苷在經(jīng)酶作用分解形成氫氰酸的同時，也產(chǎn)生苯甲醛，后者可抑制胃蛋白酶的活性，從而影響消化功能。杏仁水溶性部分的胃蛋白酶水解產(chǎn)物以500mg·kg-1的劑量對四氯化碳處理的大鼠給藥，發(fā)現(xiàn)它能抑制AST、ALT水平和羥脯氨酸含量的升高，并抑制優(yōu)球蛋白溶解時間的延長。在病理學(xué)上，杏仁水溶部分的胃蛋白酶水解產(chǎn)物能抑制鼠肝結(jié)締組織的增生，但不能抑制D-半乳糖氨引起的鼠AST、ALT水平升高。 1.4 其他作用 苦杏仁苷可特異性地抑制阿脲所致血糖升高，作用強度與血液中苦杏仁苷濃度有關(guān)�？嘈尤受者�具有抗凝血作用。小鼠熱板法和醋酸扭體法證實苦杏仁苷有鎮(zhèn)痛作用且無耐受性；小鼠給予苦杏仁苷后無豎尾反應(yīng)和烯丙嗎啡誘發(fā)的跳躍反應(yīng)�？嘈尤受�15mg·只-1，35 mg·只-1給小鼠肌注，可明顯促進有絲分裂原對小鼠脾臟T淋巴細胞的增殖。將大鼠鼠腦右額顳葉快速冰凍切片進行細胞色素氧化酶孵育染色，染色系統(tǒng)通過顯微電視圖像測量系統(tǒng)觀察，數(shù)據(jù)經(jīng)微機處理，結(jié)果表明苦杏仁苷有明顯提高腦缺血狀態(tài)下細胞色素氧化酶活性的作用�？嘈尤受赵谧罴褲舛确秶妥饔脮r間內(nèi)能提高人腎成纖維細胞（KFB）分泌的I型膠原酶活性的作用，抑制人腎KFB增值和I型膠原的表達，促使人腎KFB凋亡�？嘈尤受张c冬蟲夏草聯(lián)合作用與體外原代單層培養(yǎng)得大鼠纖維肝肝細胞，用ELISA方法監(jiān)測表明苦杏仁苷與冬蟲夏草具有明顯提高大鼠纖維肝肝細胞合成分泌白蛋白的作用。以99Mtc-植酸鈉注入小鼠或肝組織印片Ag-NOR法觀察苦杏仁苷對小鼠肝細胞吞噬功能或rDNA活化作用的影響，結(jié)果表明苦杏仁苷對其吞噬功能及rDNA的活化均有非常明顯的促進作用。 1.5 毒性 苦杏仁苷的急性毒性試驗LD50小鼠靜脈注射為25g·kg-1；大鼠靜脈注射為25g·kg-1，腹腔注射為8g·kg-1。最大耐受量：小鼠兔犬靜注和肌注均為3g·kg-1，口服均為0.075g·kg-1。人靜脈注射為5g（約0.07g·kg-1）。小鼠按500mg·kg-1靜注10只，均未死亡，而以同樣劑量灌胃給藥，則10只死亡8只。口服給藥的毒性所以大于靜脈給藥，研究證明主要是由于苦杏仁苷被腸道微生物水解產(chǎn)生較多的氫氰酸所致，如果處理小鼠使其腸道內(nèi)微生物抑制，則胃腸給藥300mg·kg-1未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，如未經(jīng)處理，則相同劑量死亡率為60%。人口服B17（苦杏仁苷）每日4g，持續(xù)半個月或靜脈注射一個月可見毒性反應(yīng)，以消化系統(tǒng)較為多見，此外還表現(xiàn)為心電圖T波改變、房性早博，停藥后以上毒性反應(yīng)均可消失。如果劑量減為每日口服0.6～1g，則可避免毒性。 2 苦杏仁苷分析方法進展 2.1 間接法：間接法的原理是通過水解或酶解把苦杏仁苷分解為苯甲醛、氫氰酸和葡萄糖，然后再測定相應(yīng)分解物的含量來間接分析苦杏仁苷。間接法包括中國藥典法、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)分析法等。 2.1.1中國藥典法（即銀量法）：使苦杏仁苷酶解產(chǎn)生氫氰酸，通水蒸氣蒸餾，溜出液導(dǎo)入氨試液中，用硝酸銀滴定液滴定吸收了氫氰酸的氨試液，從而測定苦杏仁苷的分析方法。 2.1.2化學(xué)發(fā)光法：化學(xué)發(fā)光是一種具有極高靈敏度和良好選擇性的微量及痕量分析技術(shù)。宋正華、章竹君把流動注射分析技術(shù)和化學(xué)發(fā)光法結(jié)合起來，設(shè)計了苦杏仁苷化學(xué)發(fā)光傳感器，這種新型生物傳感器的化學(xué)發(fā)光強度與苦杏仁苷量在1～200μg之間成良好線性關(guān)系，具有良好選擇性。 2.1.3 電化學(xué)分析方法：是使用一種或多種對苦杏仁苷具有水解活性的酶處理被分析物，從而產(chǎn)生氰根離子再用電極測定氰根離子濃度分析苦杏仁苷的方法。由于這種方法在測量微量痕量苦杏仁苷具有明顯的優(yōu)勢，而且易于分析測定工作自動化，近些年來發(fā)展迅速，出現(xiàn)了多種苦杏仁苷生物傳感器：Tatsuma等發(fā)展了一種基于干擾信號檢測的苦杏仁苷生物傳感器，這種傳感器將辣根過氧酶（HRP）和β-葡糖苷酶固定在熱解石墨上，通過測定由于積累過氧化氫造成的氰根陰極電流的抑制作用來測定苦杏仁苷的含量。Merkoci，A設(shè)計了把β-葡糖苷酶同銀鹽混合物固定于生物膜上的生物傳感器。上述傳感器在各自相應(yīng)的測量范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。 2.2 直接法 2.2.1薄層掃描法：薄層掃描法是一種簡捷快速的分析方法，靈敏度較高，可直接測定植物種子中的苦杏仁苷含量。 2.2.2高效液相色譜法：高效液相色譜法分離效率高，分析速度快，現(xiàn)已成為有機物定性定量分析研究的主要方法。Kimerly Wasserkrug，Ziad Elpassi用硅柱反相高效液相色譜儀檢測并分離了苦杏仁苷，并比較了用脈沖電流檢測器與紫外吸收檢測器檢測之間的不同。Seong Ho kang等用高效液相色譜和質(zhì)譜鑒定了苦杏仁苷和它的異構(gòu)體。 2.2.3紫外分光光度法：分光光度法是分析化學(xué)中普遍應(yīng)用的一種方法，這種方法具有快速靈敏準確的特點，所用儀器結(jié)構(gòu)簡單，造價低廉，使用方便，適宜作為常規(guī)分析的工具。 2.2.4毛細管膠束電泳色譜：毛細管電泳色譜是近年來發(fā)展最快的分析分離方法，它是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物，具有高靈敏度、高分辨率、高速度、樣品用量少、成本低等特點。由于苦杏仁苷是水溶性物質(zhì)，用毛細管膠束電泳色譜[MEKC]分離苦杏仁苷效果極佳。Seong Ho Kang等采用毛細管膠束電泳色譜成功地分析了苦杏仁苷和它的異構(gòu)體，并用高效液相色譜、紫外分光光度計和質(zhì)譜進行驗證，結(jié)果一致。C.Campa等用毛細管膠束電泳色譜研究了不同pH值、不同時間苦杏仁苷的水解情況。Isozaki，Takafumi等用環(huán)糊精修飾的毛細管膠束電泳色譜分離測定了苦杏仁苷及其異構(gòu)體。 2.2.5 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)：色譜法作為一種大有所為的近代分離技術(shù)普遍應(yīng)用于有機化合物的分離分析中，質(zhì)譜儀靈敏度高，特征性強，要求分析樣品必須是高度純凈物。色譜技術(shù)為質(zhì)譜分析提供色譜純的式樣，質(zhì)譜為色譜儀提供準確的結(jié)構(gòu)信息，彼此之間的依賴性促成了色譜/質(zhì)譜的聯(lián)用。David Chassage等用氣相色譜/電子轟擊質(zhì)譜[GC/EI-MS]和氣相色譜/負離子化學(xué)離解質(zhì)譜[GC/NCI-MS]聯(lián)用從多種水果中分離分析了苦杏仁苷。 3 苦杏仁苷分離提取研究進展 提取苦杏仁苷可采用80%乙醇或加水煮沸數(shù)分鐘，殘渣加水用石油醚或氯仿提取除去脂溶性成分，亦可用乙酸乙脂等溶劑進行液液分配萃取或用甲醇與乙酸乙脂恒沸混合溶劑提取，這樣可避免大量極性化合物如糖、氨基酸、肽類成分溶出；或?qū)⑺盟合扔么姿徙U、聚酰胺或混合型離子樹脂等進行預(yù)處理，除去其中酸性、酚性及離子性化合物，經(jīng)處理后的水液減壓濃縮，再用柱層析進行分離純化，其填料一般是硅膠、硅藻土、硅酸鎂、活性炭、纖維素或彼此聯(lián)合使用。由于苦杏仁苷在冷乙醇中的溶解度很小，在熱乙醇中的溶解度很大，所以亦可采用乙醇做結(jié)晶溶劑提取苦杏仁苷，原料經(jīng)過預(yù)處理和壓榨，用95%的乙醇浸提2次后進行脫脂處理，得到脫脂粕，脫脂粕經(jīng)過粉碎后，用沸醇回流裝置進行萃取，經(jīng)結(jié)晶、重結(jié)晶和純化，便可得到苦杏仁苷。蘇碧茹等用正交實驗法進行了苦杏仁成分提取工藝的優(yōu)選研究，他們選取溶媒濃度、溶媒量、提取時間、提取次數(shù)為試驗因素，得出最佳工藝條件為95%乙醇提取兩次，每次1h，6倍量乙醇為最佳工藝，由此工藝制得苦杏仁霜。 4 小結(jié) 綜上所述，苦杏仁苷具有明確的生理、藥理活性。在苦杏仁苷的分析研究方面，人們已作了大量的工作，苦杏仁苷的分析檢測方法比較完善，但國內(nèi)對苦杏仁苷分離提取工藝的深入研究較少，所以對苦杏仁苷提取工藝進行系統(tǒng)的研究并進行藥品開發(fā)具有重要應(yīng)用價值。
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