液相法測定枳殼香園柚皮中柚皮苷含量-上禾生物 | 液相法測定枳殼香園柚皮中柚皮苷含量-上禾生物 |
| 發(fā)布時間:2019-05-20 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2079 |
HPLC法測定枳殼、香園、柚皮中柚皮苷含量-上禾生物 【Abstract】Objective： To compare the content of naringin in Fructus Aurantii and Citrus wilsonii Tanaka and pummelo pericarp. Methods：the content of naringin in Fructus Aurantii and Citrus wilsonii Tanaka and pummelo pericarp were measured by the method of HPLC. The chromatographic conditions were： Hypersil column （C18，5μm， 150mm×4.0mm），methel-water-acetic acid（35：61：4） as mobile phase，the detection wavelength at 283 nm and the flow rate being 0.8ml/min. Results：The contents of naringin in Frutus Aurantii is 12.41%，the contents of Citrus wilsonii Tanaka is 8.72%，the content of naringin in pummelo pericarp is 2.74%. Conclusion：By conparison，the content of naringin in Fructus Aurantii is the highest，follow by the Citrus wilsonii Tanaka，and pummelo pericarp at least.
【Key words】HPLC； Fructus aurantii； Citrus wilsonii tanaka； Pummelo pericarp； Naringin staherb
枳殼為蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種的干燥未成熟果實。性微寒，味苦、辛、酸。入肺、脾、大腸經(jīng)。功能理氣寬中，行滯消脹。主治胸肋氣滯、脹滿疼痛、食積不化、痰飲內(nèi)停、胃下垂等。香圓（Citrus wilsonii Tanaka）來源于蕓香科（ Rutaceae）柑桔屬（Citrus），是中藥枸櫞的兩大植物來源之一。具有理氣和中、化痰止咳的功效，中醫(yī)用于緩解胃腹脹痛、嘔吐、止咳嗽等癥。柚是柑橘中的一大類，是人們喜愛的水果之一。枳殼、香園、柚皮中都含有柚皮苷，柚皮苷是一種二氫黃酮類化合物，具有抗氧化、抗病毒、抗癌、抑菌以及增加其他藥物利用度等重要生物活性。本實驗主要是采用高效液相色譜法分別測定枳殼、香園、柚皮中柚皮苷的含量，然后對三種供試品中的柚皮苷含量進行比較分析。為柚皮苷活性成分提取原料的選擇提供理論依據(jù)。 1 儀器與試藥 1.1 儀器 美國Aglient 1100 高效液相色譜儀，VWD紫外檢測器，Aglient 化學(xué)工作站，Millipore Simplicity-185 超純水器，BT224S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）。 1.2 試藥與試劑 柚皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110722-200610，供含量測定用），甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純。 1.3 供試樣品 枳殼、香園購自桂林市建干路畢生醫(yī)藥藥店，經(jīng)鑒定枳殼為蕓香科植物酸橙的干燥未成熟果實，香園為蕓香科植物枸櫞的干燥果實。柚皮為無病蟲害的柚皮，在60℃烘干粉碎備用。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil C18 柱（150×4.0mm，5μm），流動相：甲醇：水：乙酸（35：61：4），流速0.8ml/min，檢測波長283nm。在上述條件下，柚皮苷色譜峰能完全分離。 2.2 供試品溶液的制備 取各樣品粗粉0.2g，精密稱定，置于150ml圓底燒瓶中，加入50ml 50%甲醇，加熱回流提取60min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml，置10ml量瓶中，搖勻，過微孔濾膜（0.45μm），即得。 2.3 對照品溶液的制備 精密稱取柚皮苷對照品5mg，置于25ml的容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻（0.2mg/ml），再精密量取1ml，置于10ml容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（20μg/ml）。 2.4 線性關(guān)系的考察 精密量取柚皮苷對照品儲備液 （0.2mg/ml） 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml分別置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；按上述色譜條件，分別精密吸取各對照品溶液20μl，依次注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，柚皮苷對照品進樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得其回歸方程為：A=21722C+5.6434r=0.9997（n=6）。結(jié)果表明，在上述色譜條件下，柚皮苷進樣濃度在0.02～0.12mg/ml范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。 2.5 精密度試驗 在上述色譜條件下，精密吸取對照品溶液（20μg/ml）和供試品溶液各20μl，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，各測定5次，對照品溶液柚皮苷峰面積的RSD為0.25%。枳殼、香園、柚皮供試品溶液柚皮苷峰面積的RSD分別為0.21%，0.32%和0.37%。結(jié)果表明精密度良好。 2.6 穩(wěn)定性試驗 在上述色譜條件下，精密吸取枳殼、香園、柚皮供試品溶液各20μl，于0，6，12h進樣，分別測定峰面積。測得枳殼、香園、柚皮供試品溶液柚皮苷峰面積的RSD分別為0.26%，0.35%和0.21%。結(jié)果表明各供試品溶液12h內(nèi)穩(wěn)定。 2.7 重復(fù)性試驗 按供試品溶液制備方法，精密稱取同一枳殼、香園、柚皮供試品各0.2g，每種樣品稱取5份，分別制備后進樣20μl，測定峰面積。測得枳殼供試品柚皮苷峰面積的RSD為0.21%，香園供試品柚皮苷峰面積的RSD為0.27%，柚皮供試品柚皮苷峰面積的RSD為0.49%。結(jié)果說明本方法重復(fù)性良好。 2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已測定含量的枳殼樣品（含量為12.41%），香園樣品（含量為8.72%），柚皮樣品（含量為2.74%）各0.2g，每種樣品稱取5份，分別加入一定量的對照品溶液，按2.2項下制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定峰面積，計算回收率。結(jié)果枳殼樣品柚皮苷的平均回收率為100.8%（n=5），RSD為1.83%，香園樣品柚皮苷的平均回收率為98.2%（n=5），RSD為1.27%，柚皮樣品柚皮苷的平均回收率為99.8%（n=5），RSD為1.10%。 2.9 樣品含量測定 取枳殼、香園、柚皮供試品各0.2g，精密稱定，照供試品溶液制備項下操作，制成供試品溶液。在上述色譜條件下，精密吸取各供試品溶液20μl，分別注入高效液相色譜儀，按照外標(biāo)法測定各樣品中柚皮苷的含量。 3 討論 3.1 色譜條件的選擇 本實驗采用相關(guān)文獻報道的流動相甲醇-水-冰醋酸（30：68：2），甲醇-水-冰醋酸（30：63：3），乙腈-0.1%磷酸（24：76）[8]時，峰有拖尾，分離效果都不太好。流動相的配比可顯著影響樣品的保留時間，對分離效果也有一定的影響，但影響不是很大。在選擇流動相的比例時發(fā)現(xiàn)，增加流動相中甲醇的含量，可以縮短保留時間。在分離效果上，增加醋酸的濃度，可明顯改善分離效果，也可減少拖尾現(xiàn)象。其次，柱溫、流速也對保留時間、分離效果及峰形有一定的影響。通過運用HPLC對枳殼、香園、柚皮提取物中柚皮苷的含量進行測定，確定最佳色譜條件為：色譜柱為Hypersil C18 柱（150×4.0mm，5μm）；流動相：甲醇：水：乙酸（v：v：v=35：61：4），流速0.8ml/min，檢測波長283nm，進樣量為20μl。該方法使不同組分色譜峰達到基線分離， 峰形良好，樣品柚皮苷出峰時間與柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)品基本一致。
3.2 供試品制備方法的選擇 枳殼、香園、柚皮中的共同的有效成分都是柚皮苷，綜合相關(guān)文獻資料和常規(guī)的提取方法，考察了不同濃度的甲醇和乙醇提取，結(jié)果表明50%的甲醇對三種供試品的提取率最高；考察了加熱回流提取法和超聲波輔助提取法，結(jié)果表明加熱回流提取60min的效果最佳。最終確定了用50%甲醇加熱回流60min對三種供試品進行提取，該方法簡單易行，易于操作，而且重復(fù)性好。
3.3 結(jié)論 本實驗選取了三種含有柚皮苷物質(zhì)的常見藥物，采用相同的提取方法從這三種物質(zhì)枳殼、香園、柚皮中提取出柚皮苷，三種供試品稱取質(zhì)量相當(dāng)?shù)那闆r下，測得三種樣品中柚皮苷的含量，枳殼中最多，香園次之，柚皮最少。枳殼、香園、柚皮如果是不同批次，不同產(chǎn)地之間它們之間柚皮苷的含量也會有所差異，本實驗也就只是對某個產(chǎn)地，某個批次的枳殼，香園，柚皮中的柚皮苷進行含量比較。運用較少原料提取出多的柚皮苷，可以考慮從枳殼中提取柚皮苷。雖然柚皮中柚皮苷含量較少，但我國是個柚子生產(chǎn)大國，具有豐富的柚皮資源，也可以考慮從大量的柚皮中提取出柚皮苷。
柚皮甙 98% 原料基地 專業(yè)生產(chǎn) 大貨直供 長沙上禾生物 0731-84213302
免 責(zé) 申 明：
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