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一種植物提取物總酚含量測定方法

儀器

紫外-可見分光光度計(jì)、分析天平、低速離心機(jī)、恒溫水浴鍋、粉碎機(jī)、pH計(jì)、超聲波提取器、回流裝置、10 mL具塞試管、25 mL具塞三角瓶、250 mL容量瓶

藥品

沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品100mg、無水碳酸鈉500g、福林酚試劑100 mL

實(shí)驗(yàn)步驟

（一）、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精確稱量沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，用水溶解后定容于250 mL容量瓶中，得到0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。分別移取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液0.00、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mL置于10 mL具塞試管中，分別加入福林-酚試劑1 mL，搖勻后再分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)12% Na₂CO₃溶液2 mL，用水定容至10 mL，搖勻。平行三組。室溫下避光反應(yīng)1 h后，在765 nm波長下測定吸光度。以沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，研究表明，沒食子酸含量在20～120μg 范圍內(nèi)與吸光度具有良好的線性關(guān)系。

（二）、樣品總酚的提取以及樣品總酚含量的測定 （以60%乙醇提取為例）

稱取0.5g粉碎的樣品于25 mL具塞三角瓶中，加入10 mL體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液，攪拌均勻，在超聲波提取器中75℃提取50 min。提取液以3000 r/min離心20 min，取上清液，量取提取液體積，采用福林-酚比色法測定樣品提取液的總多酚濃度。

吸取1.00 mL總多酚提取液（稀釋適當(dāng)倍數(shù)）于10 mL具塞試管中，分別加入福林-酚試劑1 mL及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12%的碳酸鈉溶液2 mL并用60%乙醇定容至刻度，在室溫下避光反應(yīng)1 h，在765 nm波長處測定樣品的吸光度，試劑空白為參比（提取溶劑代替提取液），并根據(jù)工作曲線來計(jì)算提取液中總多酚含量。

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