一種植物提取物總黃酮含量的測定 | 一種植物提取物總黃酮含量的測定 |
| 發(fā)布時間:2019-08-21 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):1813 |
一種植物提取物總黃酮含量的測定 一、儀器 紫外-可見分光光度計、分析天平、低速離心機、超聲波提取器、恒溫水浴鍋、粉碎機、pH計、10mL容量瓶15個、10mL具塞試管、100mL燒瓶、10mL離心管10個、試管架2個 藥品 蘆丁標準品40mg、無水乙醇1000mL、亞硝酸鈉500g、硝酸鋁500g、NaOH 500g 實驗步驟 （一）、標準曲線繪制 1. 蘆丁標準品40mg置于稱量瓶中80℃烘干至恒重，取烘干后的20mg蘆丁標準品用水定容至100mL,得200μg/mL蘆丁標準貯備液，精確量取上述濃度蘆丁標準貯備溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL分別置于10 mL具塞試管中。 2. 向具塞試管中分別加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、3.8、3.4、3.0 mL。 3. 然后加5％亞硝酸鈉0.3 mL，搖勻，靜置6 min。 4. 再加10％硝酸鋁0.3 mL，搖勻，靜置6 min。 5. 加4％氫氧化鈉4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，搖勻，靜置12 min。 6. 于510 nm波長下測定吸光度，并以蘆丁標準濃度值為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。研究表明蘆丁標準品含量在0～0.5mg 范圍內與吸光度具有良好的線性關系。 （二）、樣品處理及總黃酮的提取 （以60%乙醇提取為例） 1. 將樣品在80℃烘干24 h，粉碎后過80目篩置于干燥器中備用。 2. 稱取500±2 mg樣品于25 mL具塞三角瓶中，使樣品位于三角瓶底部（重復3次）。 3. 每瓶加4 mL 60％乙醇，放超聲波提取器提取2 h。提取液轉至10 mL具塞離心管中。 4. 再向具塞三角瓶中加4 mL的60％乙醇，放超聲波提取器提取1 h，提取液轉至相應10 mL具塞離心管中，6000 r/min離心10 min，離心后取上清液于相應的10 mL具塞試管中。60％乙醇定容至10 mL，待測。 （三）、樣品提取液總黃酮含量的測定 準確吸取總黃酮提取液（稀釋適當倍數(shù)）2.0 mL于10 mL具塞試管中，加入60％乙醇3.0 mL,然后按步驟一中（3,4,5,6）的方法測定吸光度，試劑空白為參比（提取溶劑代替提取液），將吸光度代入標準曲線計算樣液的總黃酮含量。
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